以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
ONX-0914(PR-957)是免疫蛋白酶體抑制劑,與其它蛋白酶體的交叉反應(yīng)極小。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:960374-59-8 別名:PR-957 純度:98.16% 分子量:580.67 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
2,2'-聯(lián)四唑-1,1'-二基(洛沙坦雜質(zhì))英文名稱: 1-BromopyreneT淋巴凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體包裝500g
2,2-二基-4-異基-1,3-并二茂英文名稱: 4-Bromopyrene蛋白調(diào)解因子9抗體包裝25g
2,3,4-三-O-酰-泊酚-β-D-葡萄糖苷...英文名稱: 1,6-Diaminopyrene胰腺激抗體包裝5g
2,3-去亞異基托吡酯英文名稱: 1,3-Diaminopyrene纖溶相關(guān)蛋白B2抗體包裝1g
2,3-脫氫辛伐他汀鈉鹽英文名稱: 2,7-Di-tert-butylpyrene多聚合α/β/γ抗體包裝5g
2,4-二(三基硅烷基)-5-尿嘧啶英文名稱: 1-Nitropyrene含脯突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體包裝1g
2,4-二基-6-基-7-蝶啶英文名稱: 4-Nitropyrene外周蛋白2抗體包裝5g
2-(R)-[1-(R)-(3,5-二(三基)基...英文名稱: 2-Aminofluorene區(qū)帶蛋白PZP抗體包裝100mg
2-[(2,6-二)基]英文名稱: 2-Amino-9-fluorenone蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移1β(FTβ)抗體包裝1g
2-(巰基)腺苷 5'-三磷四鈉鹽合物英文名稱: 2-Amino-9,9-dimethylfluorene原鈣粘蛋白15抗體包裝250mg
2-基-5,6-二-3(4H)-喹唑啉醋(阿那格...英文名稱: 9-Bromofluorene原鈣粘蛋白β2抗體包裝1g
2-基-6,8-二羥基嘌呤鹽鹽英文名稱: 2-Bromofluorene原鈣粘蛋白β4抗體包裝25g
2-基-6-羥基-8-巰基嘌呤英文名稱: 2-Bromo-9-fluorenone原鈣粘蛋白γ10抗體包裝5g
2-基-6-巰基嘌呤-9-D-核苷合物英文名稱: 2-Bromo-9,9-dimethylfluorene原鈣粘蛋白γA4抗體包裝1g
2-基腺苷英文名稱: 2,7-Diaminofluorene原鈣粘蛋白γA2抗體包裝25g
乳酪棒桿菌Corynebacterium│casei 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品谷脫羧65試劑盒木糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
總狀毛霉Mucor│racemosus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品谷脫羧試劑盒果糖成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
鏈格孢霉屬Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品谷受體試劑盒糖精鈉;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
免疫蛋白酶體抑制劑(ONX-0914)自噬相關(guān)蛋白1抗體紅細(xì)胞生成受體(EPOR)檢測試劑盒EPOR ELISA Kit
β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體紅細(xì)胞生成(EPO)檢測試劑盒EPO ELISA Kit
腺瘤肉調(diào)節(jié)蛋白抗體橫紋肌輔肌動蛋白α(sm Actinin-α)檢測試劑盒sm Actinin-α ELISA Kit
銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體黑色細(xì)胞抗體(MC Ab)檢測試劑盒MC Ab ELISA Kit
水通道蛋白-7抗體黑色瘤(Melanoma)檢測試劑盒Melanoma ELISA Kit
谷轉(zhuǎn)移1抗體核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)檢測試劑盒NFkBP65 ELISA Kit
p21活化蛋白激ARHG7抗體核轉(zhuǎn)錄因子1(AP-1)檢測試劑盒AP-1 ELISA Kit
磷化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體核因子-κB亞p65親和肽(NF-κB p65)檢測試劑盒NF-κB p65 ELISA Kit
2-乙硫雙加氧抗體核因子κB亞p65親和肽(NF-κB p65)檢測試劑盒NF-κB p65 ELISA Kit