商品介紹:
用途: 膠原、網(wǎng)狀纖維 注意事項(xiàng): 含分化液,膠原、粗網(wǎng)狀纖維呈紫色至黑色、嗜銀細(xì)胞顆粒呈黑色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
矮地茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluorescein免疫球蛋超家族成員8抗體包裝5g
艾黃;六棱菊亭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Calcein白介33抗體包裝25g
艾葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Wright's stain核蛋白9抗體(Ran結(jié)合蛋白M)包裝25ml
安格洛苷 C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Giemsa stain真核翻譯起始因子3A抗體包裝5ml
安石榴甙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester磷化真核翻譯起始因子4G抗體包裝1g
安五脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Carboxyfluorescein整合α4β7抗體包裝5g
安息香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Carboxyfluorescein磷化干擾調(diào)節(jié)因子3抗體包裝10MG
澳茄新堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nigrosine water solubleISLR2蛋白抗體包裝1g
澳洲茄;澳州茄(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nigrosin alcohol solubleIQCG蛋白抗體包裝250mg
澳洲茄邊堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-HydroxycoumarinIQCK蛋白抗體包裝1g
澳洲茄堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: HeminDNA結(jié)合抑制因子1抗體包裝250mg
八角楓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Carboxyfluorescein diacetate肌苷單磷脫氫1抗體包裝25g
八角茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate干擾誘導(dǎo)蛋白P78抗體包裝5g
八角蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Aminofluorescein間粘附分子5抗體包裝100g
八角麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Aminofluorescein肌單磷IMPA3抗體包裝25g
#固氮菌Azotobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Mw:63000~77000,USP32類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 絞股藍(lán)皂苷XLIX;Gypenoside
微桿菌屬Microbacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Mw35 000 to 45 000類似cDNA順序BC027382 絞股藍(lán)皂苷;Gynostemma Pen
猴頭菇Hericium│erinaceus 質(zhì)量規(guī)格:MW:16000~24000類免疫缺陷病試劑盒5-O-基維斯阿米苷;5-O-Met
Thomas磷鉬酸蘇木素染色液費(fèi)爾氏酵母 3,5-二溴苯甲酪氨酸羥化Elisa
釀酒酵母 甘氨酰-L-谷氨酸色C氧化Elisa
大毛霉 Ketanserin鞘氨-1-磷酸Elisa
稻田彎曲嗜酸 二甲基二烯基氯化銨鞘氨Elisa
朱黃籃狀 烯酸二環(huán)戊基酯堿性焦磷酸Elisa
膠孢 二乙氧基烷苯氨酸解氨Elisa
小孢根霉須狀變種 西洛他唑磺基轉(zhuǎn)移 1A1Elisa
假單胞屬 4-(二氟甲氧基)苯甲磺基轉(zhuǎn)移 2A1Elisa
新城疫病 4-Boc-氨基β-酮脂酰-CoA合Elisa
核盤(pán) 2,4,6-三氯苯酸β-酮脂酰-CoA合Elisa
芽胞桿 1-庚炔-3-纖維Elisa
溶淀粉類芽孢桿 叔丁氧羰基-L-谷氨酸 5-環(huán)己酯3-氧?;??;d體蛋白還原Elisa
岸邊亞硫酸鹽桿 1,2-雙(基硅氧基)乙烷油體相關(guān)蛋白Elisa
樟疫霉 對(duì)氨基苯甲酰-β-氨酸末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移Elisa
深層大洋芽孢桿 泛影酸鈉末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移Elisa