以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Clinofibrate(S-8527)是一種降血脂藥和一種HMG-CoA還原酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):30299-08-2 別名:S-8527 純度:98.0% 分子式:C??H??O? 分子量:468.58 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母乙?;M蛋白H2B抗體Human SLC38A1 ELISA Kit大鼠KI-67 免疫試劑盒
膠凍樣芽胞桿菌乙酰化組蛋白H2B抗體Human SLC25A34 ELISA Kit大鼠Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1(KEAP1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化組蛋白H2AX抗體Human SLC25A33 ELISA Kit大鼠I型膠原(COL1)免疫試劑盒
平田頭菇6-2磷化熱休克蛋白27抗體Human SLC25A45 ELISA Kit大鼠II型角蛋白,骨架71(KRT71)免疫試劑盒
藤黃毛殼磷化熱休克蛋白70抗體Human ATP6AP2(Renin receptor) ELISA Kit大鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)免疫試劑盒
焦曲霉磷化熱休克因子1抗體Human SLC27A2 ELISA Kit大鼠GTP KRas 免疫試劑盒
釀酒酵母磷化熱休克因子1抗體Human SLC25A46 ELISA Kit大鼠Ghrelin受體(Ghsr)免疫試劑盒
雜色云芝磷化熱休克蛋白70抗體Human SLC27A3 ELISA Kit大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)免疫試劑盒
桔青霉E3泛蛋白連接HACE1抗體Human RHOC(Rho-related GTP-binding protein RhoC) ELISA Kit大鼠F-肌動(dòng)蛋白免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體Human SLC22A15 ELISA Kit大鼠FMS樣酪激3配體(Flt3L)免疫試劑盒
松口蘑肝核因子4α抗體Human SLAIN2 ELISA Kit大鼠FMS樣酪激3(Flt3)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化肝核因子4α抗體Human SLAMF7 ELISA Kit大鼠FK506結(jié)合蛋白12-雷帕霉相關(guān)蛋白1(FRAP1)免疫試劑盒
鮑魚側(cè)耳淋巴特異性解旋抗體Human SLC10A3 ELISA Kit大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)免疫試劑盒
竹針孢座囊菌HRAS樣抑制因子2抗體Human SLC12A4 ELISA Kit大鼠ERp57 免疫試劑盒
梨多細(xì)菌源菌熱休克蛋白家族40抗體Human SLC12A2(Solute carrier family 12 member 2) ELISA Kit大鼠E3-RSIκB 免疫試劑盒
嗜鹽動(dòng)性球菌糖蛋白P43抗體Human SLC13A4 ELISA Kit大鼠D-乳脫氫(D-LDH)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=5%白樺脂
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus Frankland and Frankland 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4%白樺脂
冰島硫化葉菌Sulfolobus│islandicus 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%羽扇豆
HMG-CoA還原酶抑制劑(Clinofibrate)ASPP1 p53凋亡激蛋白1抗體二 ≥99.8% (GC)
ASPP2/p53BP2 P53凋亡激蛋白2抗體硬酯酯 97%
AGT 血管緊張?jiān)贵w固藍(lán)RR鹽 AR
Angiotensin I 血管緊張I抗體葉 ≥98%
AT1R/AGTR1 血管緊張Ⅱ-1型受體抗體固藍(lán)B 90%
AT1R (Whole serum) 血管緊張Ⅱ-1型受體抗體高鐵試劑 98.5%
AT1R/AGTR1 血管緊張Ⅱ-1型受體抗體固藍(lán)BB鹽 AR
ATF1 活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體4-氟-3-硝三氟苯 99%