以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
VBY-825是cathepsin新型可逆抑制劑,對(duì)cathepsin B,L,S和V都具有很高的抑制力。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1310340-58-9 純度:98.0% 分子量:535.55 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
淡黃木層孔菌人小肺癌抗原Anti-Phospho LIPE (Ser855) Antibody人磷脂A2(PL-A2)
地衣芽孢桿菌小鼠5羥色Anti-Phospho MAP3K11 (Ser674) Antibody人磷脂A2(PL-A2)
釀酒酵母小鼠P物質(zhì)受體Anti-Phospho MAP2K1 (Ser218,222) Antibody人一氧化氮合成(NOS)
繩狀孢子懸浮液大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)Anti-Phospho MAPK14 (Thr180,Tyr182) Antibody人一氧化氮合成(NOS)
釀酒酵母人肺癌標(biāo)志物DR-70Anti-Phospho MAP2K1 (Thr386) Antibody人端粒(TE)
米曲霉小鼠P物質(zhì)Anti-Phospho MAPK1 (Thr202, Tyr204) Antibody人端粒(TE)
嗜鹽涅斯特連科氏菌人胚胎性硫糖蛋白抗原Anti-Phospho MAPKAPK2 (Thr334) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)
孔狀短小莖點(diǎn)霉大鼠ⅡAnti-Phospho MAPT (Ser416) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)
白地霉人本周蛋白Anti-Phospho MAPK9 (Thr183) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)
短小芽孢桿菌小鼠血管活性腸肽Anti-Phospho MDM2 (S185) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)
Rhizobium 大鼠內(nèi)Anti-Phospho MARK2 (T595) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)
發(fā)酵乳桿菌大鼠過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γAnti-Phospho MEF2D (Ser444) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)
短芽孢桿菌小鼠甲狀腺過(guò)氧化物Anti-Phospho MST1R (Ser1394) Antibody人神經(jīng)特異性烯化(NSE)
異常漢遜酵母人癌胚鐵蛋白Anti-Phospho NCF4 (Thr154) Antibody人神經(jīng)特異性烯化(NSE)
細(xì)鏈格孢小鼠αL巖藻糖苷Anti-Phospho MYL12A (S19/S20) Antibody人肌激同工MB(CK-MB)
硬毛栓孔菌大鼠環(huán)孢AAnti-Phospho NCOA2 (Ser736) Antibody人肌激同工MB(CK-MB)
跨膜蛋白166抗體橘黃裸傘甘油菌
硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體蟬花1-1綿羊肺成纖維細(xì)胞
瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白7抗體M亞家族蟬花人陰戶(hù)磷癌細(xì)胞
“冷"蛋白TRPM8抗體彩色豆馬勃4-1人外陰鱗癌細(xì)胞
cathepsin可逆抑制劑(VBY-825)砷速測(cè)盒 乙二四乙酸二鈉銅鹽
松口蘑 靈芝酸G
藍(lán)微褐鏈霉 靈芝酸B
變異鹽單胞 維生U
靈芝屬 亞苯甲?;?/span>
黑曲霉 5-甲基胞嘧啶
鏈格孢 氧化型
釀酒酵母 還原型
米曲霉 鄰苯二甲酸
紡織品 耐水色牢度 對(duì)羥基苯甲
枯草芽胞桿 蜜二糖
國(guó)畢赤酵母 乙二四乙酸二鈉鋅鹽
釀酒酵母 3,4-二羥基
扁平鏈霉 3,4-二羥基
肺炎鏈球 色