以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
BMS-538203是高效的HIV整合酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):543730-41-2 分子量:269.23 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
茜雙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phlorizin絲裂原活化蛋白激相互作用蛋白1抗體包裝100g
羌活(寬葉羌活)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PhlorizinMPP2蛋白抗體包裝25g
羌活(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phloretin發(fā)育相關(guān)蛋白抗體包裝5g
羌活(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PhloretinMS4A15蛋白抗體包裝1g
羥基紅花黃色A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rhyncholphylline四度跨膜蛋白3抗體包裝250mg
羥基積雪草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: β-Sitosterol黑色瘤相關(guān)抗原12抗體包裝5g
羥基積雪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glabridin黑色瘤相關(guān)抗原2抗體包裝100MG
羥基酪;3,4-二羥基乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Podophyllotoxin黑色瘤相關(guān)抗原5抗體包裝10MG
羥基茜草/紅紫(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Podophyllotoxin同源盒基因Msx2抗體包裝1g
喬松(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Podophyllotoxin磷化雙微體2癌基因抗體包裝5g
茄尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Fructose磷化雙微體2癌基因抗體包裝100ml
芹菜苷; 芹黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fructose三聚單克抗體包裝25ml
芹菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Harpagoside黑色瘤相關(guān)抗原B1抗體包裝1ml
芹菜-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-...英文名稱: Harpagide微小染色體維持缺陷蛋白5抗體包裝25g
芹菜-7-O-(2G-鼠李糖)龍膽糖苷英文名稱: Sec-O-Glucosylhamaudol結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
黑孢霉Nigrospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,選擇性活化Ⅹ因子抑制劑抗核糖體P蛋白抗體試劑盒大果桉B;Macrocarpal B
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,蛋白激B(Akt)信號(hào)通路阻斷劑抗核糖核蛋白抗體試劑盒DL-丁香樹脂酚;DL-Syringar
: =CCTCCAA97021資源名稱: 新疆糖單孢菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%抗核仁抗體試劑盒對(duì)羥基安息香;p-Hydroxyben
HIV整合酶抑制劑(BMS-538203)脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體甜菜鹽鹽 Betaine Hydrochloride >98.0%(T)Human
電壓門控鈉通道5α抗體甜菜鹽鹽 Betaine Hydrochloride >98.0%(T)Human
因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體雙(2-乙) Bis(2-chloroethyl) Ether >99.0%(GC)Human, Mouse
S100A1抗體1,2-雙(2-乙氧)乙烷 1,2-Bis(2-chloroethoxy)ethane >98.0%(GC)Human, Mouse
磷鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體1,2-雙(2-乙氧)乙烷 1,2-Bis(2-chloroethoxy)ethane >98.0%(GC)Human
因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體2,2'-聯(lián)喹啉 2,2'-Biquinoline >98.0%(T)Human
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-2抗體2,2'-聯(lián)喹啉 2,2'-Biquinoline >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體4,4'-聯(lián)吡啶 4,4'-Bipyridyl >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
泛連接Siah24,4'-聯(lián)吡啶 4,4'-Bipyridyl >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat