以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑(CPT-11) | Irinotecan hydrochloride trihydrate | 1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Irinotecan(CPT-11)鹽酸鹽三水合物能通過抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶1阻止DNA的解旋。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:136572-09-3 純度:99.80% 分子量:677.18 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
大腸埃希氏菌傷門氏菌體蛋白O抗原抗體Anti-PML Antibody卷曲同源物8(FZD8)
黑綠青霉傷寒氏菌鞭毛抗原H抗體Anti-PMS2 Antibody卷曲同源物7(FZD7)
茶褐斑盤多毛孢14-3-3γ抗體Anti-PML Antibody(PB1140)卷曲同源物6(FZD6)
熒光假單胞菌同型小種G14-3-3σ抗體Anti-PMVK Antibody卷曲同源物5(FZD5)
東方伊薩酵母14-3-3τ蛋白抗體Anti-PNN/DRSP Antibody卷曲同源物4(FZD4)
暗黑橄欖色鏈霉菌14-3-3β抗體Anti-PNP Antibody卷曲同源物3(FZD3)
棉毛狀嗜熱霉SLAMF6抗體Anti-PNP Antibody卷曲同源物2(FZD2)
柱隔孢菌a-包襯蛋白抗體Anti-PNP Antibody卷曲同源物10(FZD10)
土生類諾卡氏菌磷化突觸融合蛋白1抗體Anti-PNPT1 Antibody卷曲同源物1(FZD1)
橙鱗傘線粒體內(nèi)鈣結(jié)合天冬/谷載體蛋白抗體Anti-PODXL Antibody聚集蛋白聚糖(AGC)
牛布魯氏菌病陰性血清品線粒體二羧載體蛋白11抗體Anti-POLB Antibody巨軸索神經(jīng)蛋白(GAN)
紅平紅球菌eIF4E結(jié)合蛋白2抗體Anti-POLL Antibody巨噬幼紅黏附蛋白(MAEA)
龜裂鏈霉菌血清淀粉樣蛋白P成份抗體Anti-POLH Antibody巨噬炎性蛋白5(MIP5)
匍枝根霉原變種轉(zhuǎn)錄因子Sox3抗體Anti-POLI Antibody巨噬炎性蛋白4α(MIP4α)
白側(cè)耳神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒蛋白5抗體Anti-POLR2A Antibody巨噬炎性蛋白3β(MIP3β)
細(xì)鏈格孢突觸結(jié)合蛋白11抗體Anti-POLR2A Antibody巨噬炎性蛋白3α(MIP3α)
軸突生長誘向因子G1配體抗體蕓薹生鏈格孢(斜面)小鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物
神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白1抗體棘孢曲霉小鼠腸上皮細(xì)胞提取物
利鈉肽受體A抗體大腸埃希氏菌噬菌體小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞提取物
Noxa蛋白抗體疏棉狀嗜熱霉小鼠肺成纖維細(xì)胞提取物
拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑(CPT-11)乳粉 沙門氏(陽性 Neochamaejasmine A激動Elisa
棘孢青霉 Hypoglaunine A半胱氨酸Elisa
兔出血癥病 Toxyloxanthone D抗Elisa
Pseudomonas koreensis Gambogin腸激Elisa
地衣芽孢桿 Isogambogenin精Elisa
香菇 Reneilmol亞精Elisa
枯草芽孢桿 Isolintetralin腐Elisa
膠質(zhì)芽孢桿(可以訂購) Pluviatolide尸Elisa
阿魏側(cè)耳 木二糖多聚球蛋白受體Elisa
慢生根瘤 Bursehernin轉(zhuǎn)化生長因子β1Elisa
相思根瘤 Curcumenone肌原纖蛋白Elisa
柱形胞鏈霉 Pasakbumin B過氧化物體增殖因子活化受體γElisa
埃及無色需堿 Bryonolol黑色代謝Elisa
球孢白僵 Nigranoic acid11-酮Elisa
乳桿屬 Sagittatoside B饑餓Elisa