公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:NUAK1抑制劑(HTH-01-015)
英文名稱:HTH-01-015
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
HTH-01-015是一高效選擇性NUAK1抑制劑,IC50值為100nM,對(duì)NUAK2無(wú)明顯抑制(IC50>10uM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1613724-42-7 純度:99.65% 分子量:468.55 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白Anti-Phospho FLNA (Ser2152) Antibody人顆粒A(Gzms-A)
三葉草根瘤菌小鼠促腎上腺皮質(zhì)激Anti-Phospho FOXO1 (Ser256) Antibody人顆粒A(Gzms-A)
澳型核果褐腐病菌小鼠骨特異性堿性磷BAnti-Phospho FOXO4 (Ser197) Antibody人牛小腸堿性磷(CIAP)
緩慢葡萄球菌 大鼠Anti-Phospho G3BP1 (Ser232) Antibody人牛小腸堿性磷(CIAP)
慢生根瘤菌人硫氧化還原蛋白Anti-Phospho GABBR2 (Ser783) Antibody人超氧化物歧化(SOD)
香菇人窖蛋白Anti-Phospho GAB1 (Tyr627) Antibody人超氧化物歧化(SOD)
綠粘帚霉大鼠多巴Anti-Phospho GAP43 (Ser41) Antibody人二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)
巴斯德畢赤酵母小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Anti-Phospho GABRG2 (Ser327) Antibody人二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)
真姬菇人普通急性淋巴白血病抗原Anti-Phospho GJA1 (Ser368) Antibody人組織蛋白去乙?;?HD)
耐久腸球菌大鼠高靈敏度促甲狀腺激Anti-Phospho GRIN2A (Tyr1325) Antibody人組織蛋白去乙酰化(HD)
褐球固氮菌小鼠半胱蛋白抑制劑/胱抑CAnti-Phospho GRIN2B (Ser1166) Antibody人甲基化(Methylase)
藍(lán)色犁頭霉人黑色激Anti-Phospho GRIN2B (Ser1480) Antibody人甲基化(Methylase)
蘋果雙殼菌*小鼠第八因子相關(guān)抗原Anti-Phospho GRIN2B (Tyr1252) Antibody人抗性磷5b(TRACP-5b)
枯草芽胞桿菌大鼠高敏甲狀腺Anti-Phospho GRIN2B (Tyr1472) Antibody人抗性磷5b(TRACP-5b)
火木層孔菌大鼠谷脫羧自身抗體Anti-Phospho GRIN2C (Ser1096) Antibody人磷肌3激(PI3K)
暗色擬莖點(diǎn)霉人表皮角蛋白Anti-Phospho GRIN2B (Tyr1336) Antibody人磷肌3激(PI3K)
神經(jīng)細(xì)胞特異性微管蛋白抗體黃薄孔菌人胃黏膜正常上皮細(xì)胞
磷糖異構(gòu)抗體藏紅深黃孔菌人十二脂腸腺癌
睪丸特異性Y蛋白樣5抗體光亮小紅孔菌人肺癌雜交細(xì)胞
甲狀腺受體相互作用蛋白1抗體*白干皮孔菌人臍靜脈內(nèi)皮(膀胱癌)細(xì)胞
NUAK1抑制劑(HTH-01-015)黑曲霉 N-羥基-5-降烯-2,3-二甲酰亞
仁果殼小圓孢 三鹽酸亞精
黑淺灰鏈霉 亞精
巴氏醋桿 四鹽酸精
平菇 精
蘇云金芽孢桿 腐
灰黃青霉 代乙酰
盤長(zhǎng)孢狀盤孢 6-羥基多巴
代爾夫特食酸 α-酮戊二酸鈉
羅氏小核* α-酮戊二酸
解脂亞羅酵母 無(wú)水檸檬酸
豬丹絲 檸檬酸
釀酒酵母 棕櫚酸
長(zhǎng)白山近藤氏酵母 2-硫代酸
釀酒酵母 脂磷壁酸