以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
C75trans是C75的trans形式,C75是脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):191282-48-1 別名:C 75 trC-75 trans-racemic;trans-C75 純度:99.86% 分子量:254.32 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
解脂亞羅酵母周期D2抗原Anti-CENPQ Antibody人原鈣黏1(PCDH1)
地衣芽孢桿菌周期D3抗原Anti-CENPU Antibody人原鈣黏1(PCDH1)
竹針孢座囊菌色P450 3A4抗原Anti-CEP135 Antibody人白介2受體(IL-2R)
水稻節(jié)桿菌富半胱肝結(jié)合蛋白61抗原Anti-CEP131 Antibody人白介2受體(IL-2R)
砷、銻、鉍、汞、銀化物檢測(cè)試劑 人巨病UL23抗原Anti-CEP135 Antibody人皮膚T虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)
大腸埃希氏菌多巴受體-D1抗原Anti-CEP152 Antibody人皮膚T虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)
黑木耳多巴受體-D3抗原Anti-CEP170 Antibody人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)
葡萄座腔菌多巴受體-D4抗原Anti-CEP152 Antibody人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)
毛束霉多巴受體-D5抗原Anti-CEP170 Antibody人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)
油菜菌核病菌多巴β羥化(抗原)Anti-CEP290 Antibody人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)
地星結(jié)直腸癌缺失基因抗原Anti-CEP290 Antibody人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)
鹽沼鹽桿菌雙皮質(zhì)抗原Anti-CEP350 Antibody人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)
根桿菌屬損傷DNA結(jié)合蛋白2抗原Anti-CEP57 Antibody人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)
樟疫霉*防御β1抗原Anti-CEP55 Antibody人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)
釀酒酵母防御β1抗原(人)Anti-CEP78 Antibody人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)
pIB139防御β2抗原(小鼠)Anti-CEP95 Antibody人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)
前列環(huán)受體抗體變異鏈球菌人卵巢腺癌細(xì)胞
磷蛋白聚糖PTPRZ抗體人蒼白桿菌人皮膚鱗狀 細(xì)胞癌細(xì)胞
神經(jīng)特異蛋白酪磷N5抗體Bacillusvireti人皮膚T淋巴細(xì)胞瘤
神經(jīng)細(xì)胞突觸蛋白PCLO抗體BacillusdrentensisSD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑(C75 trans)金黃硬皮馬勃 Dregeoside Aa1
熒光假單胞 Dregeoside A11
玫煙色棒束孢 Dodoviscin A
鏈霉 Dihydromicromelin B
微黃原小單孢 Dihydroepistephamiersine 6-aceta
梨殼針孢 Diacetylpiptocarphol
秀珍菇 Dendocarbin A
枯草芽孢桿 Dehydroheliobuphthalmin
黃棕色鏈霉 Dehydroespeletone
釀酒酵母 去甲氧基去乙酰氧基土槿甲酸 B
牛肝 Daphniyunnine A
吉氏芽孢桿 Daphnilongeranin C
生活飲用水 鎘 Cycloshizukaol A
異常漢遜酵母 Cyclocommunol
枯草芽孢桿 Cyclocerberidol