商品介紹:
SB216763是一種高效的,具有選擇性的糖原合成酶激酶3(GSK-3)抑制劑,對(duì)GSK-3α和GSK-3β的IC50值均為34.3nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):280744-09-4 純度:97.00% 分子式:C??H??Cl?N?O? 分子量:371.22 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大腸桿菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human INTS3(IntegRator complex subunit 3) ELISA Kit顆粒體蛋白(GRN)ELISA Kit
弗氏志賀氏菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human GPX1(Glutathione peroxidase 1) ELISA Kit顆粒溶(GNLY)ELISA Kit
地衣芽胞桿菌肝生長(zhǎng)因子受體抗體Human GPT2(Alanine aminotransferase 2) ELISA Kit顆粒H(GZMH/CGL2/CTSGL2)ELISA Kit
產(chǎn)色鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human EPB42(Erythrocyte membrane protein band 4.2) ELISA Kit顆粒B(Gzms-B)ELISA Kit
黃曲霉受體酪激抗體Human LPO(Lactoperoxidase) ELISA Kit顆粒A(Gzms-A)ELISA Kit
蠟狀芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human SESN3(Sestrin-3) ELISA Kit人抗組織轉(zhuǎn)谷??贵wIgA(tTG-IgA)ELISA Kit
尖孢鐮刀菌黑皮質(zhì)3受體抗體Human CTSK(Cathepsin K) ELISA Kit人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA Kit
假單胞菌屬Menin抑癌蛋白抗體Human SERPINH1(Serpin H1) ELISA Kit人抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA Kit
異常威克漢姆酵母錯(cuò)配修復(fù)蛋白3抗體Human MAT1A(S-adenosylmethionine synthase isoform type-1) ELISA Kit人抗滋養(yǎng)膜抗體(ATA)ELISA Kit
馬勃微小染色體維持缺陷蛋白7抗體Human DEFB103A(Beta-defensin 103) ELISA Kit人抗中性粒顆??贵w(ANGA)ELISA Kit
伊氏副球菌單核趨化蛋白2抗體(小鼠)Human ACAT1(Acetyl-CoA acetyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit人抗中性??贵w(ANA)ELISA Kit
洋蔥伯克霍爾德氏菌單核趨化蛋白3抗體Human ITGAV(Integrin alpha-V) ELISA Kit人抗中性粒核周抗體(pANCA)ELISA Kit
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)單核趨化蛋白3抗體Human KLK2(Kallikrein-2) ELISA Kit人抗中性粒胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)巨噬炎癥蛋白18抗體Human ETFDH(Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondrial) ELISA Kit人抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA Kit
棱蓋多孔菌MITF相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體Human PCCB(Propionyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial) ELISA Kit人抗著絲點(diǎn)抗體(ACA/CENP)ELISA Kit
梨黑斑鏈格孢雷帕霉靶蛋白抗體Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA Kit人抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)ELISA Kit
鵝艾美耳球蟲(chóng)Eimeria│anseris 質(zhì)量規(guī)格:>98%
暗產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│phaeochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:1:12000,BR芹菜
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma分裝莽草
GSK-3抑制劑(SB 216763)FGF10 成纖維生長(zhǎng)因子10抗體孔雀石綠 Biological stain
FGF13 纖維母生長(zhǎng)因子13抗體紫 AR
FGFBP 纖維生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白抗體紫 IND(pH 0.1-2.0)
BFGFR/FGFR1 性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體萘酚綠B ≥80% (HPLC)
Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) 化性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體1,10-菲羅啉,一水 AR,98%
Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766) 化性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體鄰苯二酚紫 IND
FGFR2/CD332 成纖維生長(zhǎng)因子受體2抗體鄰菲羅啉鹽鹽 98%
FGFR3/CD333 成纖維生長(zhǎng)因子受體3抗體紅 AR