商品介紹:
Aloxistatin(E64d)是一種廣譜的可滲透細(xì)胞的半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease)抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:88321-09-9 別名:E64d;E64c ethyl ester 純度:98.22% 分子式:C??H??N?O? 分子量:342.43 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
糖化酵母巨噬炎癥蛋白2( GROβ)抗體Human NCOR1(Nuclear receptor corepressor 1) ELISA Kit可溶性O(shè)X40L(sOX40L)ELISA Kit
側(cè)耳金屬硫蛋白抗體Human FUT6(Alpha-(1,3)-fucosyltransferase) ELISA Kit可溶性E選擇(sE-selectin)ELISA Kit
綠色木霉磷化微管相關(guān)蛋白2抗體Human HNRNPK(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K) ELISA Kit可溶性Endoglin(sENG/sCD105)ELISA Kit
芽孢桿菌屬內(nèi)皮MMRN1蛋白抗體Human DEFB1(Beta-defensin 1) ELISA Kit可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA Kit
硬毛栓孔菌磷化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體Human CCBL1(Kynurenine–oxoglutaRate transaminase 1) ELISA Kit可溶性CD44變體9(sCD44-v9)ELISA Kit
拜氏色鹽桿菌磷化肝生長因子受體(原癌基因)抗體Human AVP(Vasopressin-neurophysin 2-copeptin) ELISA Kit可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA Kit
多根硬皮馬勃磷化肝生長因子受體(原癌基因)抗體Human DEFB4A(Beta-defensin 4A) ELISA Kit可溶性CD38(sCD38)ELISA Kit
釀酒酵母磷化髓樣白血病-1抗體Human IRS2(Insulin receptor substRate 2) ELISA Kit可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA Kit
平菇磷化雙微體2癌基因抗體Human SLC8A1(Sodium/calcium exchanger 1) ELISA Kit可溶性CD28(sCD28)ELISA Kit
芽枝狀枝孢磷化肌增強因子2抗體Human ESRRG(Estrogen-related receptor gamma) ELISA Kit可溶性CD276分子(sCD276/sB7-H3)ELISA Kit
小馬勃磷化肌增強因子2抗體Human SLC11A2(Natural resistance-associated macrophage protein 2) ELISA Kit可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA Kit
溶藻弧菌磷化絲裂原活化蛋白激激1抗體Human INTS3(IntegRator complex subunit 3) ELISA Kit可溶性CD163分子(sCD163)ELISA Kit
蟬花*磷化微管相關(guān)蛋白2抗體Human GLUD1(Glutamate dehydrogenase 1, mitochondrial) ELISA Kit可溶性CD146分子(sCD146)ELISA Kit
哈茨木霉絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體Human GPX1(Glutathione peroxidase 1) ELISA Kit可溶性CD14(sCD14)ELISA Kit
閃光須霉磷化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體Human LPO(Lactoperoxidase) ELISA Kit可溶性CD105(sCD105)ELISA Kit
腸炎沙門氏菌磷化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體Human GLUD1(Glutamate dehydrogenase 1, mitochondrial) ELISA Kit可溶性CD100(sCD100)ELISA Kit
??曝愄厥暇?/span>Cobetia│marina 質(zhì)量規(guī)格:95%,BR齊墩果
白地霉Geotrichum│candidum 質(zhì)量規(guī)格:1:3000,BR青藤堿
大腸埃希氏菌DH5α/797(797-PknB)Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:≥50 U/mg,sigma 原裝雙氫
cysteine protease抑制劑(Aloxistatin)FDC-SP/ADC 濾泡樹突分泌蛋白抗體紅 AR
Fe65 protein/APBB1 鐵蛋白Fe65抗體橙 IND
FGF1/AFGF 性成纖維生長因子抗體橙 ACS reagent,85 %
FGF3/Oncogene INT2 纖維母生長因子3抗體紅鈉鹽 IND
FGF4 纖維母生長因子4抗體紅鈉鹽 ACS reagent, 95 %
FGF5 纖維母生長因子5抗體亞藍(lán) Biological stain
KGF/FGF7 纖維母生長因子7抗體亞藍(lán) 超純級,Dye content, >90%(HPLC)
FGF8/HBGF-8 成纖維生長因子8抗體間紅 Indicator