以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
NB-598Maleate是一種有效的,競爭性的squalene epoxidase抑制劑,通過金合歡醇通路抑制甘油三酸酯的生物合成。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):155294-62-5 純度:98.0% 分子式:C??H??NO?S? 分子量:565.74 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
溶血葡萄球菌mRNA cap甲基轉(zhuǎn)移抗體Human SMC5 ELISA Kit大鼠阿立新A(Orexin A)免疫試劑盒
解脂假絲酵母解脂變種5’-三磷聚核苷抗體Human SMC6 ELISA Kit大鼠阿黑皮原(POMC)免疫試劑盒
芽胞桿菌組三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體Human SMAP1 ELISA Kit大鼠δ基乙酰脫水(ALAD)免疫試劑盒
季也蒙假絲酵母甲狀腺促進(jìn)激alpha鏈Human SMCHD1 ELISA Kit大鼠γ谷-半胱合成(γ-GCS)免疫試劑盒
嗜冷海桿狀菌A型流感病H7N9凝集抗體Human SMAP2 ELISA Kit大鼠γ干擾受體(IFN-γR)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌組蛋白去乙酰化3抗體Human SMCR7/MID49 ELISA Kit大鼠γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒
水生黃桿菌人乙肝表面抗原抗體(包被)Human LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3) ELISA Kit大鼠γ分泌免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌腎損傷分子1抗體(甲型肝炎病受體1)Human SMARCA4 ELISA Kit大鼠γ-基丁受體亞基α1(GABRA1)免疫試劑盒
平臍蠕孢菌組富含脯糖蛋白抗體Human SMCR7L ELISA Kit大鼠γ基丁(GABA)免疫試劑盒
大孢硬皮馬勃HER3受體抗體Human SMARCC1 ELISA Kit大鼠β-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)相容蛋白(β-TrCP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化HER3受體抗體Human SMARCB1(SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1) ELISA Kit大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒
塔賓曲霉磷化HER3受體抗體Human SMARCD1 ELISA Kit大鼠β(BTC)免疫試劑盒
產(chǎn)黃青霉磷化HER4抗體Human SLC5A3 ELISA Kit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)免疫試劑盒
細(xì)纖芽孢桿菌糖蛋白β-1B抗體Human SMARCD2 ELISA Kit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化熱休克蛋白27抗體Human SLTM ELISA Kit大鼠β羥丁(βOHB)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌HEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白7A蛋白抗體Human SLC6A8 ELISA Kit大鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)免疫試劑盒
卷枝霉屬Helicostylum│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品D(十)-無葡萄糖
栓菌屬Trametes│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>97%(HPLC)茶堿
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%阿魏乙酯
squalene epoxidase抑制劑APOH 載脂蛋白H抗體2′-脫氧胞苷-5′-二鈉鹽 98%
APOE 載脂蛋白E抗體2′-脫氧腺苷-5′-單 98%
APOJ 載脂蛋白J抗體2,2-二苯 99%
Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體3,5-二氟芐 97%
APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體4,4'-二氨二苯酮 98%
APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體3-羥-D-酪氨 98%
phospho-APP/ABPP(Tyr757) 化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體1,4-二氫-2- 95%
phospho-APP/ABPP(Thr668) 化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體6,8-二羥芘-1,3-二磺二鈉鹽 97%