以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Apilimod(STA5326)甲磺酸鹽是IL-12/IL-23抑制劑,能抑制IFN-γ/LPS刺激的人PBMC產(chǎn)生IL-12,IC50為10nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):870087-36-8 別名:STA 5326 mesylate 純度:99.11% 分子量:610.7 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
*發(fā)根土壤桿菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體Human rT3(Reverse Triiodothyronine) ELISA Kit人糖脂抗體(glycolipid)免疫試劑盒
尖槐藤根瘤菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框151抗體Human SCG2(Secretogranin II) ELISA Kit人糖盞蛋白免疫試劑盒
黑褐鵝膏菌腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體Human RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit人糖原磷化同工MM(GP-MM)免疫試劑盒
高盧根瘤菌復(fù)合前列腺特異性抗原單克抗體Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit人糖原磷化同工II(GP-II)免疫試劑盒
松口蘑組織蛋白z抗體Human SDH(Succinate Dehydrogenase) ELISA Kit人糖原磷化同工BB(GP-BB)免疫試劑盒
鮑魚(yú)菇2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框84抗體Human RNASEN(Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit人糖原磷化(GP)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌枯草亞種磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體Human sdLDL(Small Dense Low Density Lipoprotein) ELISA Kit人糖原合成激3(GSK-3)免疫試劑盒
樟疫霉組織蛋白A抗體Human RNASET2(Ribonuclease T2) ELISA Kit人糖原合成激(GSK)免疫試劑盒
擬康寧木霉CD34抗體Human RPS6Kβ1(Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1) ELISA Kit人糖原合成免疫試劑盒
擬青霉周期D3抗體Human Sec23b(protein transport protein Sec23B) ELISA Kit人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)免疫試劑盒
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌緊密連接蛋白1抗體(C端)Human RTN4(Reticulon 4) ELISA Kit人糖皮質(zhì)激受體β(GR-β)免疫試劑盒
蓋氏海桿狀菌轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體Human rT3(Reverse Triiodothyronine) ELISA Kit人糖皮質(zhì)激受體α(GR-α)免疫試劑盒
帚狀曲霉核黃轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Human proPSA(precursor of Prostate Specific Antigen) ELISA Kit人糖磷脂酰肌(GPI)免疫試劑盒
大腸埃希菌磷化鈣介質(zhì)抗體Human RARS(Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit人糖類抗原72-4(CA72-4)免疫試劑盒
粘孢白僵菌7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體Human RARα(Retinoic Acid Receptor Alpha) ELISA Kit人糖類抗原50(CA50)免疫試劑盒
黃曲霉衰變加速因子CD55抗體Human PRR4(Proline Rich Protein 4, Lacrimal) ELISA Kit人糖類抗原19-9(CA19-9)免疫試劑盒
海桿狀菌Marinobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:活:>200 NADP units/mg,BCc-fos ELISA Kit二氫歐山芹醋酯
假單胞菌Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCDCP1試劑盒二氫魚(yú)藤
指狀青霉Penicillium│digitatum 質(zhì)量規(guī)格:>96%,BRCD8分子試劑盒二氫黃連堿
IL-12/IL-23抑制劑(Apilimod mesylate)Patched/PTCH抗體包裝100g
前列腺E合成抗體包裝25g
過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體包裝500g
絲/蘇蛋白激Plk1抗體包裝1g
磷化絲/蘇蛋白激Plk1抗體包裝5g
親環(huán)蛋白(親環(huán))PPIG抗體包裝100g
磷化親環(huán)蛋白(親環(huán))PPIG抗體包裝25g
磷化蛋白激AKT底物1抗體包裝25g
磷化腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體包裝5g
富含脯的酪激2抗體包裝1g
磷化富含脯的酪激2抗體包裝1g
磷化富含脯的酪激2抗體包裝25g
磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體包裝5g
磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體包裝1ml
磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體包裝1g