商品介紹:
英文名稱:SAG 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg SAG是一種有效的Smo receptor激動(dòng)劑,能夠活化Hedgehog信號(hào)通路,Kd值為59nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):912545-86-9 純度:99.61% 分子量:490.06 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
慢生根瘤菌型肝炎病-NS3反轉(zhuǎn)錄激活蛋白2抗體Human TCERG1 ELISA Kit大鼠精1(ARG1)免疫試劑盒
狹截盤多毛孢間隙連接蛋白47抗體Human TCF7 ELISA Kit大鼠精加壓受體1A(AVPR1A)免疫試劑盒
解脂假絲酵母神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(肝癌相關(guān)基因2)抗體Human TCF7L1 ELISA Kit大鼠精(Arg)免疫試劑盒
解蛋白奇異球菌糖蛋白磷脂D抗體Human TCHP ELISA Kit大鼠緊密連接蛋白1(ZO1)免疫試劑盒
南節(jié)桿菌G蛋白偶聯(lián)受體49抗體Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) ELISA Kit大鼠緊密連接蛋白(Ocln)免疫試劑盒
傷口埃希氏菌DNA復(fù)制抑制因子抗體Human TCIRG1 ELISA Kit大鼠金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(MTP1)免疫試劑盒
構(gòu)巢裸胞殼G蛋白α抑制蛋白2抗體Human TBX5 ELISA Kit大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒
短小克銀漢霉G蛋白偶聯(lián)受體γ4抗體Human TCL1A ELISA Kit大鼠金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒
嗜乳桿菌G基丁B型受體2抗體Human TBX21/T-bet ELISA Kit大鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)免疫試劑盒
坎氏弧菌葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗體(熱休克蛋白70蛋白5)Human TBX22 ELISA Kit大鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒
短裙竹蓀1-4葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94抗體Human TBCE ELISA Kit大鼠解整合樣金屬蛋白19(ADAM19)免疫試劑盒
戊糖乳桿菌糖原合激-3β抗體Human TCEA1 ELISA Kit大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌東北亞種糖原合激-3β抗體Human TBX6 ELISA Kit大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒
卵形孢霉屬三磷鳥(niǎo)苷環(huán)水解抗體Human TBCEL ELISA Kit大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)免疫試劑盒
皺褶假絲酵母促代謝型谷受體5抗體Human TAOK3 ELISA Kit大鼠結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒
暗黑微綠鏈霉菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體GROaHuman TCEA3 ELISA Kit大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)免疫試劑盒
平菇Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)白綿馬AA
擲孢酵母Sporobolomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品6-姜烯酚
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)魯斯考皂苷元
Smo receptor激動(dòng)劑(SAG)天藍(lán)褐鏈霉 三特丁基磷四氟酸鹽胰島樣生長(zhǎng)因子2Elisa
釀酒酵母 硝酸銣轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βElisa
Vibrio 正庚基溴化鎂γ干擾Elisa
假單孢 氧化銦唾液酸Elisa
長(zhǎng)根奧德菇(長(zhǎng)根菇) 6,12-二溴屈成纖維生長(zhǎng)因子Elisa
枯草芽孢桿 二(1-金剛烷基)膦血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Elisa
蕈狀芽孢桿 鄰苯二甲酸二酯氨酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
柯氏黑蛋巢 2,6-二氨基蒽醌天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
長(zhǎng)孢被孢霉 氫氧化鍶 八水合物乳酸脫氫Elisa
石南棒桿 氧化鍺谷氨酰轉(zhuǎn)肽Elisa
冷海水黃桿 3-(基硅基炔基)噻吩總膽紅Elisa
圈卷產(chǎn)色鏈霉 D-2-三氟氨酸直接膽紅Elisa
泡盛曲霉 2-氨基-3-溴-5-甲酸血氨Elisa
大腸埃希氏 N4-苯甲酰胞苷白蛋白Elisa
玫瑰核鏈霉 Fmoc-Val-OSu總蛋白Elisa