以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Roflumilast是一種選擇性的PDE4抑制劑,作用于PDE4A1,PDEA4,PDEB1和PDEB2,IC50分別為0.7,0.9,0.7和0.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):162401-32-3 純度:99.87% 分子量:403.21 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
伯克氏菌21號(hào)染色體開放閱讀框63抗體Human ETS1 ELISA Kit兔子谷胱甘肽(GSH)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌4號(hào)染色體開放閱讀框52抗體Human EXOSC1 ELISA Kit兔子睪(T)免疫試劑盒
毛胡枝子根瘤菌4號(hào)染色體開放閱讀框40抗體Human ETS2 ELISA Kit兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)免疫試劑盒
居巖牙殖球菌Cullin3抗體Human EXOSC10 ELISA Kit兔子高密度脂蛋白膽固(HDL-C)免疫試劑盒
ATCC 35056分裂周期同源蛋白40抗體Human ETV4 ELISA Kit兔子肝生長因子(HGF)免疫試劑盒
白蘑卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白106抗體Human ETV6(ETS translocation variant 6) ELISA Kit兔子甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒
成團(tuán)泛菌染色質(zhì)修飾蛋白1A抗體Human EVI2A ELISA Kit兔子干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌葉綠體伴侶蛋白抗體(蘋果)Human ETV5 ELISA Kit兔子二氧化(DAO)免疫試劑盒
釀酒酵母分裂周期蛋白20B抗體Human ESRP2 ELISA Kit兔子端粒(TE)免疫試劑盒
污黑腐皮殼周期調(diào)控蛋白D1抗體Human ESRRB ELISA Kit兔子低密度脂蛋白膽固(LDL-C)免疫試劑盒
東京根霉周期蛋白B1結(jié)合蛋白1抗體Human ESX1 ELISA Kit兔子蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒
放射形根瘤菌周期調(diào)控因子14A抗體Human ETF1 ELISA Kit兔子蛋白聚糖(ACAN)免疫試劑盒
異常威克漢姆酵母第七號(hào)染色體開放閱讀框12抗體Human ETFA ELISA Kit兔子膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒
副干酪乳桿菌碳酐11抗體Human ERO1L ELISA Kit兔子單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
Bacillus aryabhattaiα酪蛋白抗體Human ERP29 ELISA Kit兔子催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒
白鱗馬勃周期調(diào)控相關(guān)蛋白1Human ERO1LB ELISA Kit兔子促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
棉阿舒囊霉Ashbya│gossypii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTH糖蛋白試劑盒馬兜鈴
小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTGF-β誘導(dǎo)早期基因1試劑盒牡荊內(nèi)酯
雞傷寒沙門氏菌Salmonella│gallinarum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物激級(jí)Tau蛋白ELISA Kit毛地黃
PDE4抑制劑(Roflumilast)1-基海因鹽鹽;AHD,1-基乙內(nèi)酰脲鹽鹽英文名稱: Sodium Aminosalicylate Dihydrate陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體包裝5g
2-脫氧-L-胸苷/替比夫定英文名稱: Methylthioninium Chloride Trihydrate陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3抗體包裝100g
3-氮雜雙環(huán)【3.3.0】辛烷鹽鹽英文名稱: Warfarin Sodium催產(chǎn)受體(縮宮受體)抗體包裝25g
4-ene-戊英文名稱: Warfarin Sodium緊密連接蛋白抗體包裝10g
5-基楊,美沙拉秦英文名稱: Lomustine卵巢癌反應(yīng)抗原抗體包裝50g
5-三基尿嘧啶英文名稱: Fluphenazine Decanoate大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體包裝1g
9-基米諾環(huán)鹽鹽英文名稱: Dobutamine Hydrochloride神經(jīng)叢蛋白B1抗體包裝100mg
Donepezil HCl (type I)英文名稱: 5,5-Diphenylhydantoin磷化蛋白激C(T410)抗體包裝1g
Donepezil HCl (type III)英文名稱: Adamantane磷化蛋白激C mu型抗體包裝1g
L-犬尿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propafenone Hydrochloride磷化蛋白激C mu型抗體包裝250mg
LGD-4033英文名稱: Propafenone Hydrochloride表面受體PILRβ抗體包裝100g
Loperamide HCl英文名稱: Xanthene-9-carboxylic acid前列腺癌相關(guān)蛋白4抗體包裝25g
ML-176;SR-3335英文名稱: Xanthone線粒體導(dǎo)肽解β抗體包裝100g
R-鹽普拉克索英文名稱: Methyl eugenol富含脯蛋白15抗體包裝25g
Salubrinal英文名稱: Geraniol維生K依賴的蛋白C輕鏈抗體包裝5g