商品介紹:
GSK101(GSK1016790A)是一個(gè)新穎的TRPV4激活劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:942206-85-1 純度:98.07% 分子量:655.61 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
紅曲霉特異蛋白抗體Anti-KCNA2 Antibody雙特異性磷1(DUSP1)
反卷毛殼THAP2蛋白抗體Anti-KCNA1 Antibody雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1A(DYRK1A)
云芝栓孔菌瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族)Anti-KCNA1 Antibody雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)
黑木耳云章氏酵母瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族)Anti-KCNA3 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激樣激1(DCLK1)
芽胞桿菌屬形成相關(guān)凋亡蛋白2抗體Anti-KCNA4 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激(DCX)
鞘桿菌轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白2(TWF2)
瘤突曲霉核凋亡因子THAP1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白1(TWF1)
卷枝毛霉顆粒相關(guān)蛋白TIA-1抗體Anti-KCNB1 Antibody(PB0149)衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)
糞腸球菌胸腺核蛋白1抗體Anti-KCNA6 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白4(FBLN4)
褐囊蜜環(huán)菌腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)相互作用蛋白3抗體Anti-KCND1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白3(FBLN3)
蘇云金芽孢桿菌景洪亞種辣椒受體3抗體Anti-KCNH1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)
蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草)TEX261蛋白抗體Anti-KCND2 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白1(FBLN1)
亞褐鈸孔菌促甲狀腺受體抗體Anti-KCND3 Antibody衰變加速因子(DAF)
三線鐮孢磷化酪激A抗體Anti-KCNH1 Antibody輸入蛋白9(IPO9)
阿姆斯特丹曲霉Toll樣受體3抗體Anti-KCNIP2 Antibody輸入蛋白8(IPO8)
RP4質(zhì)粒T受體γ抗體Anti-KCNH2 Antibody輸入蛋白7(IPO7)
突觸結(jié)合蛋白12抗體腸炎沙門氏菌亞種大鼠成骨細(xì)胞
突觸結(jié)合蛋白10抗體葡萄汁有孢漢遜酵母大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞
14-3-3蛋白抗體高地芽胞桿菌大鼠滑膜細(xì)胞
角質(zhì)蛋白α抗體大腸埃希氏菌(凍干粉)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
TRPV4激活劑(GSK1016790A)菊異莖點(diǎn)霉 勞氏紫尿苷二磷酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移Elisa
草木棲劍 齊多夫定總抗氧化能力Elisa
海唯鹽 4-松油超氧化物歧化Elisa
新城疫病 L-半乳糖Elisa
孢小克銀漢霉輪生變種 2′7′-二熒光二乙酸鹽氧化型Elisa
黃斑紅菇 6-羧基熒光二乙酸酯二Elisa
釀酒酵母 卡莫司汀蛋白質(zhì)羰基Elisa
橙色微桿 無氨基酵母氮源(YNB)乙酰酯Elisa
弗氏檸檬酸桿 腺苷-5′-二磷酸鈉鹽溶Elisa
枯草芽孢桿 聚乳酸羥基乙酸共聚物5羥色Elisa
微球 聚乳酸羥基乙酸共聚物乙酰Elisa
威爾酵母 硫鏈絲ATPElisa
枯草芽孢桿 2-(溴甲基)苯甲色氧化Elisa
深海微小桿 化銣抗肽Elisa
香菇 阿德福韋酯凝集Elisa