以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
本試劑盒是一種通過化學(xué)發(fā)光法測定細(xì)胞內(nèi)ATP含量從而來定量檢測活細(xì)胞數(shù)目的試劑盒。本試劑盒的性能和用途與Promega公司的同類產(chǎn)品基本相同,對于相同的細(xì)胞樣品本試劑盒的發(fā)光效果更強(qiáng)一些。 本試劑盒比常見的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它細(xì)胞活力測定方法更加簡單快捷。只需把試劑盒提供的檢測試劑與培養(yǎng)細(xì)胞等體積混合,反應(yīng)10分鐘后即可進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測。無需洗滌細(xì)胞,也無需更換或去除培養(yǎng)液。并且化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定,在反應(yīng)開始后的10分鐘內(nèi)無顯著變化,30分鐘內(nèi)的下降不超過10%。 本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測,也非常適合大量樣品的高通量篩選檢測。 本試劑盒線性范圍廣,檢測靈敏度高。用96孔板進(jìn)行檢測時,本試劑盒在0-50,000個細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度范圍內(nèi)有良好的檢測效果,并且在僅有幾百個細(xì)胞時仍有良好的線性關(guān)系。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量僅為50個/孔時,發(fā)光強(qiáng)度可達(dá)空白孔的5倍左右。 ATP,作為重要的能量分子,在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP是細(xì)胞新陳代謝的一個重要指標(biāo),也是具有代謝活性細(xì)胞的重要標(biāo)志性分子,并和活細(xì)胞數(shù)目成良好的線性關(guān)系。因此,ATP含量能很好地反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目,即本試劑盒可以通過測定ATP含量來進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)或檢測細(xì)胞活力。 本試劑盒通過ATP檢測細(xì)胞活力的原理參考下圖。借助ATP依賴的螢光素酶催化的螢光素發(fā)光反應(yīng),ATP可以通過測定化學(xué)發(fā)光來進(jìn)行定量。由于ATP含量能很好地反映活細(xì)胞的數(shù)目,而ATP含量和發(fā)光強(qiáng)度成正比,這樣就可以簡單地通過化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度來計算出細(xì)胞活力或細(xì)胞數(shù)目。 細(xì)胞活力檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)檢測ATP的原理圖 對于96孔板,我們推薦使用100μl細(xì)胞培養(yǎng)液和100μl的檢測試劑,總體積為200μl,此時本試劑盒可以進(jìn)行100次檢測。對于384孔板,我們推薦使用25μl細(xì)胞培養(yǎng)液和25μl的檢測試劑,總體積為50μl,此時本試劑盒可以進(jìn)行400次檢測。也可以用其它體積的試劑進(jìn)行檢測,但細(xì)胞培養(yǎng)液和檢測試劑體積的比例必須為1:1。 儲存條件:室溫,有效期2年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)英文名稱:sRANKL ELISA Kit腺苷活化蛋白激γ3抗體包裝1g
可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)英文名稱:sTLR9/sCD289 ELISA Kit腺苷單磷活化蛋白激β2抗體包裝25g
可溶性Toll樣受體4(sTLR4)英文名稱:sTLR4 ELISA Kit磷化周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體包裝5g
可溶性Toll樣受體2(sTLR2)英文名稱:sTLR2 ELISA Kit周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體包裝5g
可溶性P選擇(sP-selectin)英文名稱:sP-selectin ELISA Kit磷化蛋白激B2抗體包裝25g
可溶性Endoglin(ENG/sCD105)英文名稱:ENG/sCD105 ELISA Kit磷化鐵蛋白Fe65抗體包裝5g
可溶性CD86(B7-2/sCD86)英文名稱:B7-2/sCD86 ELISA Kit磷化鐵蛋白Fe65抗體包裝25g
可溶性CD40配體(sCD40L)英文名稱:sCD40L ELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
可溶性CD30配體(sCD30L)英文名稱:sCD30L ELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝100ml
可溶性CD30(sCD30)英文名稱:sCD30 ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝500ml
顆粒B(Gzms-B)英文名稱:Gzms-B ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝5MG
顆粒A(Gzms-A)英文名稱:Gzms-A ELISA Kit磷化周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體包裝1g
抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)英文名稱:EMAb ELISA Kit發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體包裝100g
抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)英文名稱:pANCA ELISA Kit磷化發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體包裝25g
抗中性粒/中心體抗體(ACA)英文名稱:ACA ELISA Kit蛋白激B3包裝25ml
磷化通道蛋白2抗體C反應(yīng)蛋白(CRP)Ruxolitinib phosphate (INCB018424 phosphate) 是一種有效的 JAK1/2 抑制劑, IC50 分別為3.3 nM/2
細(xì)胞活力檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)季也蒙邁耶氏酵母 3,5-二叔丁基苯酸膽堿酯酶檢測試劑盒
平田頭菇 4-BOC-哌-1-硫酰膽酸檢測試劑盒
釀酒酵母 (4-溴苯基)脲膽汁酸檢測試劑盒
短密木霉 4-氨基氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸叔丁酯彈性蛋白檢測試劑盒
粘質(zhì)沙雷氏 N-Cbz-L-苯氨酸彈性蛋白酶檢測試劑盒
枯草芽孢桿 4-氯-2,6-二氟蛋白(肽酰脯氨酰順;反異構(gòu)酶)檢測試劑盒
白僵 2-溴-3-羥基苯甲蛋白C檢測試劑盒
黑曲霉 四氯鄰苯二蛋白S檢測試劑盒
糞腸球(糞鏈球) 1H-1,2,4-三氮唑-1-甲脒單鹽酸鹽蛋白Z檢測試劑盒
藤黃微球 3-甲氧基-2-甲苯蛋白Z依賴的蛋白酶抑制劑檢測試劑盒
枯草芽孢桿 硫酸鈦蛋白多糖檢測試劑盒
淺黃鏈霉 3-氯異喹啉蛋白激酶A檢測試劑盒
牛鏈球 蘭氏D群 2,3-二氟-4-溴蛋白激酶C檢測試劑盒
大腸埃希 6-溴-3H-異苯并呋喃-1-酮蛋白激酶C-β1檢測試劑盒
釀酒酵母 2-甲基-3-噻吩甲酸乙酯蛋白酪氨酸激酶檢測試劑盒