以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
SOCE抑制劑 | SKF-96365 hydrochloride | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
SKF-96365是SOCE的抑制劑,能夠在結(jié)直腸癌細(xì)胞里通過引起細(xì)胞周期阻滯和凋亡,表現(xiàn)抗腫瘤活性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:130495-35-1 純度:99.73% 分子量:402.91 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
巨大芽孢桿菌離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC4抗體Human PRKX ELISA Kit血影蛋白(spectrin)
解淀粉芽孢桿菌磷化離子通道蛋白Kv1.3抗體Human Presenilin-1 ELISA Kit血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)
雞油菌離子通道蛋白家族成員4抗體Human PREPL ELISA Kit血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)
熒光假單胞菌電壓門控性通道蛋白亞基kv5.1抗體Human PREP(Prolyl endopeptidase) ELISA Kit血小板源性生長因子D(PDGF-D)
蘑菇輪枝孢電壓門控性通道蛋白亞基kv6.1抗體Human PPT2 ELISA Kit血小板因子4(PF-4/CXCL4)
大腸埃希氏菌電壓門控性通道蛋白亞基KV6.3抗體Human PRH1 ELISA Kit血小板因子4(PF4)
弗雷德里克斯堡假單胞菌磷化內(nèi)流通道蛋白KCNJ1抗體Human PRIC285 ELISA Kit血小板因子3(PF-3)
棲稻假單胞菌鈣激活通道蛋白KCNT2抗體Human PPWD1 ELISA Kit血小板衍生生長因子CC(PDGF-CC)
白僵菌內(nèi)流通道蛋白Kir5.1抗體Human PQBP1 ELISA Kit血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)
好食脈孢菌磷化內(nèi)流通道蛋白Kir5.1抗體Human PRICKLE1 ELISA Kit血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)
厚垣普奇尼亞菌*磷化ATP敏感性通道亞基kir6.2抗體Human PRICKLE3 ELISA Kit血小板衍生生長因子(PDGF)
卷枝毛霉原變型電壓門控通道蛋白KVβ.2抗體Human PRAM1 ELISA Kit血小板衍化生長因子BB(PDGF-BB)
谷棒桿菌電壓門控性通道蛋白Kv1.4抗體Human CSNK2A1(Casein kinase II subunit alpha) ELISA Kit血小板衍化生長因子(PDGF)
黃柄曲霉電壓門控性通道Kv1.6抗體Human PRKAA2(5′-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2) ELISA Kit血小板型磷果糖激(PFKP)
根瘤菌磷化通道蛋白DRK1抗體Human PRIM1 ELISA Kit血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)
運(yùn)動節(jié)桿菌電壓門控性通道Kv2.2抗體Human PRC1 ELISA Kit血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)新芒果苷
刺孢吸鏈霉菌北京變種Streptomyces│hygrospinosus var. beigingenis 質(zhì)量規(guī)格:99.8原子%D芒果苷
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)果糖
SOCE抑制劑白地霉 五氟苯硫酚副結(jié)核抗體Elisa
短小芽孢桿 五氟β-防御Elisa
Rhizobium 2,3,4,5,6-五氟苯α乳清蛋白Elisa
發(fā)酵乳桿 3-乙蛋清白蛋白Elisa
短芽孢桿 2-氟-6-硝苯副結(jié)核分枝桿抗體Elisa
異常漢遜酵母 1-金剛烷α-半乳糖Elisa
細(xì)鏈格孢 1-溴金剛烷異鎖鏈Elisa
硬毛栓孔 1,4-雙(二苯膦基)丁烷I型膠原蛋白Elisa
濟(jì)南諾卡氏 三苯二?;视虴lisa
死亡谷芽孢桿 1,4-哌二乙磺酸二鈉鹽維生KElisa
帽形黃色土桿 3-氟苯基酸γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移Elisa
大腸埃希氏 三苯基5-羥脯氨酸Elisa
黑根霉 (二甲基)苯基硅烷谷氨酰半胱氨酸連接Elisa
蟻巢傘屬 三基硅烷合成Elisa
淺黃金色單胞 基基硅烷肝型脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa