以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
CZC24832是PI3Kγ選擇性抑制劑,在PI3Kγ依賴的fMLP誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中IC50為1.0μM,且對(duì)其它多種蛋白的脫靶效應(yīng)極有限。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1159824-67-5 純度:98.01% 分子量:364.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
痢疾志賀氏菌51105抗Ⅵ型膠原抗體Human SYCN(Syncollin) ELISA Kit人維生B3(VB3)免疫試劑盒
大腸桿菌半胱蛋白8抗體Human SYK(Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit人維生B2(VB2)免疫試劑盒
空腸彎曲桿菌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體Human TA(Anti-Teichoic Acid Antibody) ELISA Kit人維生B12(VB12)免疫試劑盒
干草鞘單胞菌表面趨化因子受體10抗體Human SPD(Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit人維生B1(VB1)免疫試劑盒
短裙竹蓀轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體Human SPA(Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit人維生A(VA)免疫試劑盒
嗜熱脂肪地芽孢桿菌鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體Human SPTAN1(Alpha-Fodrin) ELISA Kit人微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)抗體免疫試劑盒
Roseivivax lentus周期檢測點(diǎn)激1抗體Human SPG(Surfactant Associated Protein G) ELISA Kit人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)免疫試劑盒
栗疫菌鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1抗體Human SSTR1(Somatostatin Receptor 1) ELISA Kit人微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)免疫試劑盒
假芝尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體Human SPTβN4(Spectrin Beta, Non Erythrocytic 4) ELISA Kit人微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3A(MAP1LC3A)免疫試劑盒
華盛頓腥擲孢菌周期H抗體Human sSELP(Soluble P-Selectin) ELISA Kit人微管微絲交聯(lián)因子1(MACF1)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌6號(hào)染色體開放閱讀框15抗體Human ST2(Syntenin 2) ELISA Kit人微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(ABCC3)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌載脂蛋白A1抗體Human TAF13(TATA Box Binding Protein Associated Factor 13) ELISA Kit人微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(ABCC2)免疫試劑盒
芽胞桿菌抑癌基因p14抗體Human TAGLN(Transgelin) ELISA Kit人微管蛋白,γ復(fù)合體關(guān)聯(lián)蛋白3(TUBGCP3)免疫試劑盒
穴形節(jié)皮菌抑癌基因p16抗體Human STAT1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1) ELISA Kit人網(wǎng)膜(omentin)免疫試劑盒
植物乳桿菌P27抗體/周期依賴激抑制劑Human TARS(Threonyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)免疫試劑盒
盤孢屬9號(hào)染色體開放閱讀框171抗體Human SYCN(Syncollin) ELISA Kit人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)免疫試劑盒
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BSCXC趨化因子受體3試劑盒知母皂苷BIII
: Z234資源名稱: 金黃色葡萄球菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCXC趨化因子配體16試劑盒蜂斗菜內(nèi)酯A
腐皮鐮孢(斜面)Fusarium solani 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRc-sis ELISA Kit風(fēng)信子
PI3Kγ抑制劑(CZC24832)脯脫氫抗體包裝1g
蛋白調(diào)解因子8抗體包裝250mg
蛋白C抑制因子抗體包裝1g
原鈣粘蛋白γB5抗體包裝25g
蛋白體PSMα5抗體包裝5g
含patatin樣磷脂6抗體包裝1g
神經(jīng)叢蛋白A4抗體包裝5g
多形性腺瘤基因樣蛋白2抗體包裝100g
表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體包裝25g
磷化心臟磷蛋白抗體包裝500g
磷化心臟磷蛋白抗體包裝100ml
蛋白酪磷樣N前體蛋白抗體包裝500ml
26S蛋白調(diào)節(jié)亞型p55抗體包裝100g
過氧化物肌氧化抗體包裝25g
prox-1抗體包裝5g