以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DAPI染液(即用型) | DAPI Dying Solution | 10ml | 1~3天 |
商品介紹:
本產(chǎn)品濃度已經(jīng)過優(yōu)化,確??梢詽M足各種常規(guī)染色的需要。如需使用特定濃度的DAPI,請選購DAPI(SY0495)或DAPI染液(5mg/ml)(SY0496)。 DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑,它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜,但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用來檢測酵母線粒體DNA,葉綠體DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為360nm和460nm。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 CAS:28718-90-3 分子式:C16H17Cl2N5 分子量:350.25 儲存條件:4℃,有效期六個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
海藻糖(TREH)英文名稱:TREH ELISA Kit3號染色體開放閱讀框55抗體包裝2g
過氧化物體增殖物激活受體δ(PPARδ)英文名稱:PPARδ ELISA Kit3號染色體開放閱讀框65抗體包裝10MG
過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)英文名稱:PPARγC1α ELISA Kit3號染色體開放閱讀框14抗體包裝1g
過氧化物體增殖物激活受體γ(PPARγ)英文名稱:PPARγ ELISA Kit3號染色體開放閱讀框20抗體包裝25g
過氧化物體增殖物激活受體α(PPARα)英文名稱:PPARα ELISA Kit3號染色體開放閱讀框23抗體包裝5g
過氧化物體生物合成因子2(PEX2)英文名稱:PEX2 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框31抗體包裝1g
過氧化還原6(PRDX6)英文名稱:PRDX6 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框32抗體包裝5g
過氧化還原4(PRDX4)英文名稱:PRDX4 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框36抗體包裝1g
過氧化還原1(PRDX1)英文名稱:PRDX1 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框38抗體包裝1g
歸巢關(guān)聯(lián)細(xì)胞黏附分子(HCAM)英文名稱:HCAM ELISA Kit3號染色體開放閱讀框58抗體包裝5g
胱天蛋白9(CASP9)英文名稱:CASP9 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
胱天蛋白8(CASP8)英文名稱:CASP8 ELISA KitCD5抗體包裝5g
胱天蛋白7(CASP7)英文名稱:CASP7 ELISA Kit補(bǔ)體C4BPA蛋白抗體包裝250mg
胱天蛋白3(CASP3)英文名稱:CASP3 ELISA Kit4號染色體開放閱讀框29抗體包裝50MG
胱天蛋白14(CASP14)英文名稱:CASP14 ELISA Kit4號染色體開放閱讀框21抗體包裝100mg
枯草芽孢桿菌Bacillus│sublitis 質(zhì)量規(guī)格:> 98.5%,BR,可用于培養(yǎng)早期生長反應(yīng)因子1試劑盒異莨菪亭;Isoscopoletin
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品早期前列腺癌抗原2試劑盒乙酰天麻;Acegastrodine
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥19000IU/mg,EP6早期活化抗原CD69試劑盒氧化白藜蘆;Oxyresveratro
DAPI染液(即用型)清酒乳桿清酒亞種 2-乙氧基-6-氟苯柯薩奇病A16Elisa
鏈格孢屬 2-甲氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧戊環(huán)P53蛋白Elisa
糞生糞殼 2-甲基-4,6-二羥基嘧啶類白抗原AElisa
球毛殼 鹽酸達(dá)泊K-RasElisa
深褐芽孢桿 2-甲基-1,3-環(huán)己二酮nm23-H1Elisa
多主葡萄殼 2-硝基-4-氨基苯酚尿Elisa
Bacteroides sartorii 4-氨基-6-羥基嘧啶二肽基肽ⅧElisa
假單胞 3-甲基-血小板衍化生長因子ABElisa
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS5 4,6-二氟-1,3-苯并噻唑-2-脂聯(lián)Elisa
假單胞屬 阿維巴坦鈉溶組織阿米巴IgAElisa
枯草芽孢桿 2-溴甲基四纖溶抗纖溶復(fù)合物Elisa
蠟樣芽孢桿 環(huán)戊酮肟型肝炎IgM抗體Elisa
出芽短梗霉* 3-(3-甲氧基苯基)-1,2-惡唑-5-型肝炎病抗體Elisa
鏈霉 1-二甲基氨基-2-硝基乙烯抗肌動蛋白抗體IgGElisa
擬粉紅鎖擲孢酵母 噁唑-5-羧酸乙酯可溶性淀粉前體蛋白αElisa