商品介紹:
Dacomitinib是一種特異性的不可逆抑制劑ERBB家族抑制劑,作用于EGFR,ERBB2和ERBB4,IC50分別為6nM,45.7nM和73.7nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1110813-31-4 別名:PF-00299804;PF-299804 純度:99.91% 分子量:469.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
雅致小克銀漢霉基末端激3抗體Human PRTFDC1 ELISA Kit胰島受體β(ISR-β)
黃柄曲霉磷化活化蛋白激B抗體Human PRRT1 ELISA Kit胰島受體α(INSRA)
棲土曲霉JmjC結構域組蛋白去甲基化H3-K36抗體Human PSMA1 ELISA Kit胰島生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)
黑化鏈霉菌組蛋白去甲基化JARID2抗體Human PRPF8 ELISA Kit胰島生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)
環(huán)帶毛霉JAK和微管相互作用蛋白2抗體(JAK和微管相互作用蛋白2)Human PRUNE ELISA Kit胰島抗體(Anti-Ins)
麥芽糖假絲酵母活化蛋白激B抗體Human PRPH2 ELISA Kit胰島降解(IDE)
分枝枝頂孢磷化蛋白酪激JAK-2抗體Human PRPSAP2 ELISA Kit胰島(INS)
芽孢桿菌凋亡清除受體抗體Human PRPS1L1 ELISA Kit胰島淀粉樣多肽(IAPP)
彎孢菌磷化原癌基因c-Jun抗體Human PRPS1 ELISA Kit原激活肽(TAP)
副豬嗜血桿菌Notch配體Jagged 2蛋白抗體Human PRR13 ELISA Kit原Ⅱ(Try-Ⅱ)
雪腐鐮孢組蛋白去甲基化Jarid1C抗體Human C13orf33(Uncharacterized protein C13orf33) ELISA Kit(trypsin)
香港科恩氏菌組蛋白去甲基轉移JMJD1B抗體Human PRUNE ELISA Kit衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)
可可鏈霉菌可可亞種親聯(lián)蛋白2抗體Human PRPF8 ELISA Kit一氧化碳血紅蛋白(HbCO)
地衣芽胞桿菌驅動蛋白家族蛋白13B抗體Human PRPH2 ELISA Kit一氧化化氮(NO)
蘇云金芽胞桿菌日本亞種驅動蛋白家族蛋白7抗體Human PRMT6 ELISA Kit一氧化氮合(NOS)
地生翅孢殼CREB結合蛋白抗體Human PRMT8 ELISA Kit一氧化氮合成(NOS)
芒弗里亞擬盤多毛孢Pestalotiopsis│mangifolia 質量規(guī)格:>98.0%(N)(T)馬錢苷
光神農球菌Agrococcus│baldri 質量規(guī)格:>97.0%(GC)蝙蝠葛堿
新月彎孢Curvularia│lunata 質量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標記濱蒿內酯
ERBB家族抑制劑(Dacomitinib)褐球固氮 磷酸三辛酯沙門氏抗體Elisa
藍色犁頭霉 原乙酸三乙酯優(yōu)球蛋白Elisa
蘋果雙殼* (RS)-1H--2-羧酸支原體抗體Elisa
枯草芽胞桿 2-乙酰芴囊尾蚴IgGElisa
火木層孔 9,10-二甲基蒽膠原Elisa
暗色擬莖點霉 原碳酸四乙酯1型膠原Elisa
美澳型核果褐腐病 苯基三乙氧基硅烷2型膠原Elisa
巨型艾美耳球蟲 (3-苯甲基)膦酸二乙酯端粒Elisa
枯草芽孢桿 順二酸二丁基錫端粒Elisa
黃硬皮馬勃 三羥甲基烷(TMP)微小隱孢子蟲病Elisa
土曲霉 2-乙酰檸檬酸三乙酯結核病γ干擾Elisa
泥生囊殼 (S)-(+)-4-異基-3-酰-2-惡唑烷酮微小隱孢子蟲病抗體Elisa
光帽鱗傘(滑菇) 1,1,1-三(羥甲基)乙烷乳脂Elisa
黑曲霉 (R)-(-)-2-苯酸肉堿棕櫚酰轉移-ⅠElisa
綠針假單胞 (S)-(+)-2-苯酸脂肪甘油三酯脂Elisa