以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CCCP通過破壞線粒體膜電位(MMP)來抑制STING介導(dǎo)的IFN-β產(chǎn)生。CCCP且抑制STING及其下游信號分子TBK1和IRF3的激活。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:555-60-2 別名:Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone;Carbonyl Cyanide m-Chlorophenylhydrazone 純度:99.83% 分子量:204.62 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
石頭農(nóng)霉菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白31(PRSS31)
豐盛毛霉磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGA7 Antibody絲蛋白23(PRSS3)
埃里鏈格孢磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白23(PRSS23)
肺炎克雷伯氏菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白21(PRSS21)
多粘類芽胞桿菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白2(PRSS2)
間座殼屬磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白12(PRSS12)
白地霉MED17抗體Anti-ITGAX Antibody絲蛋白1(PRSS1)
plenti sgRNA(MS2)_puro(Plasmid#73795)pSAMca089-p FUGW-U6-BsmBl-sg RNA009-EF1α-Puro-WPRE甲狀腺激受體相互作用13/瘤病16型E1結(jié)合蛋白抗體Anti-ITGB1 Antibody(PB0063)絲/蘇激4(STK4)
釀酒酵母甲狀腺激受體β抗體(THβ1,THβ2)Anti-ITGB4 Antibody絲/蘇激39(STK39)
壯觀絲衣霉血小板跨膜反應(yīng)蛋白1抗體Anti-ITGB2 Antibody絲/蘇激3(STK3)
蛛絲細(xì)薄菌組織因子抗體Anti-ITGB2 Antibody(PB0111)絲/蘇激25(STK25)
高山被孢霉腫瘤壞死因子配體超家族成員13抗體Anti-ITGB3 Antibody絲/蘇激19(STK19)
海床游動微菌特異定蛋白質(zhì)編碼Y1抗體Anti-ITGB4 Antibody絲/蘇激16(STK16)
蠟狀芽孢桿菌跨膜蛋白4超家族成員3抗體Anti-ITK Antibody絲/蘇激11(STK11)
大腸桿菌Toll樣受體7抗體Anti-ITGB4 Antibody(PB0064)絲/蘇激10(STK10)
黑腐皮殼菌T白血病同源盒蛋白3抗體Anti-ITLN1 Antibody絲/蘇/酪激1(STYK1)
分泌性磷蛋白24抗體柱狀假絲酵母小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞
抗藥蛋白抗體雷氏普羅威登斯菌小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞
細(xì)胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體阿伯丁沙門氏菌小鼠皮下脂肪細(xì)胞
肌蛋白結(jié)合蛋白γ2抗體千葉類芽胞桿菌小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞
STING介導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生抑制劑(CCCP)橙環(huán)銹傘 鋁、砷、、鋇、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鈉、鎳、磷、鉛、硒、鍶、釩、鋅/Al,AKT蛋白Elisa
摩洛哥芽孢桿 銀、鋁、砷、鋇、鉍、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、銦、、鋰、鎂、錳、鈉、鎳、鉛、硒、鍶、釩、鋅/Ag,腺苷酸活化蛋白激Elisa
枯草芽孢桿 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉,銻、鍶、、釩、鋅/Ag,絲裂原活化蛋白激Elisa
裂褶 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、銻、鍶、、釩、鋅/Ag,β淀粉樣蛋白1-40Elisa
同絲毛殼 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、銻、鍶、、釩、鋅/Ag,β淀粉樣蛋白1-42Elisa
球孢白僵 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、銻、鍶、、釩、鋅/Ag,胰島淀粉樣多肽Elisa
明串珠屬 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、銻、鍶、、釩、鋅/Ag,嘌呤脫氨Elisa
釀酒酵母 銀、鋁、砷、、鋇、鈹、鈣、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鉬、鈉、銻、鍶、、釩、鋅/Ag,球蛋白AElisa
美澳型核果褐腐病 鋁、砷,、鋇、鈹、鉍、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎵、鋰、鎂、錳、鎳、鉛、銻、錫、鍶、鈦、、釩、鋅/Al分泌型球蛋白AElisa
釀酒酵母 磷酸正十八酯球蛋白MElisa
玫瑰色紅球 3-溴酮酸球蛋白TElisa
構(gòu)巢曲霉 堿性橙2胰蛋白Elisa
米曲霉 愈創(chuàng)甘油氫--ATPElisa
鐵銹灰鏈霉 化十六烷基吡啶 一水合物低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4Elisa
菊異莖點霉 2-羥基-1,4-萘醌酪氨酸激下游蛋白7Elisa