商品介紹:
Silibinin為抗癌和預(yù)防化合物,能抑制細(xì)胞增殖和遷移。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):22888-70-6 別名:Silybin;Silibinin A;Silymarin I 純度:98.0% 分子量:482.44 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
多毛棒桿菌堿性磷(AP)標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX10 Antibody谷轉(zhuǎn)(ALT)
新月彎孢FITC標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX15 Antibody谷酰酰肽環(huán)轉(zhuǎn)移(QPCT)
異常畢赤酵母Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX2 Antibody谷酰2(GLS2)
天藍(lán)微紅鏈霉菌PE-CY5標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX3 Antibody谷酰(GLS)
枯草芽孢桿菌PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX3 Antibody谷酰合成(GS)
孢囊放線菌PE-Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgGAnti-SOX3 Antibody谷酰果糖-6-磷轉(zhuǎn)2(GFPT2)
西唐氏鏈霉菌生物標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX4 Antibody谷脫羧樣蛋白1(GADL1)
棲熱菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX5 Antibody谷脫羧2(GAD2)
大腸桿菌PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX6 Antibody谷脫羧1(GAD1)
山東戈登氏菌PE-Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX9 Antibody谷脫氫2(GLUD2)
馬爾他布魯氏菌Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX7 Antibody谷脫氫(GDH)
黎巴嫩鏈霉菌黎巴嫩亞種Cy5標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SOX9 Antibody谷受體相互作用蛋白1(GRIP1)
枯草芽孢桿菌Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP3 Antibody谷豐富蛋白(GRP)
非洲哈茨木霉Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP2 Antibody谷半胱連接(GCLM)
奇異變形菌PE標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP1 Antibody谷肽(GluAP)
鹽城海桿菌PE-Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP3 Antibody古梅斯蛋白2(AMZ2)
死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體紅色青霉大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物
神經(jīng)絲蛋白抗體瘡皰桿菌大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物
巢蛋白NID2抗體解凝乳類芽胞桿菌大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物
谷受體2C抗體動(dòng)物雙歧桿菌大鼠腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞提取物
細(xì)胞增殖和遷移抑制劑(Silibinin)整齊格孢 β-羥丁酸脫氫
偏腫栓孔 ?;趸?/span>
大腸埃希氏 槲皮3-O-蕓香糖苷
橫梗霉屬 亮氨酸脫氫
金灰青霉 甲基 3-O-阿魏酰奎尼酸酯
地衣芽孢桿 硫酸酯
大腸埃希 甲基 5-O-阿魏??崴狨?/span>
河流諾卡氏 α-L-巖藻糖苷
平菇—唐無(wú)孢 膽固氧化
解脂假絲酵母 脂蛋白脂
產(chǎn)黃青霉 甘油-3-磷酸氧化
釀酒酵母 膽紅氧化
新黑曲霉 精氨酸(牛肝)
假單胞 谷轉(zhuǎn)氨
貝氏節(jié)桿 泰樂(lè)霉