商品介紹:
D8-MMAE是MMAE的氘代形式。MMAE抑制微管蛋白的聚合。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):2070009-72-0 別名:D8-Monomethyl auristatin E;D8-Vedotin 純度:98.31% 分子量:726.03 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
堀越氏芽孢桿菌26S蛋白調(diào)節(jié)亞型p55抗體Anti-Cd59 Antibody6-羥多巴(6-OHDA)
類芽孢桿菌過(guò)氧化物肌氧化抗體Anti-CD58 Antibody60S核糖體蛋白L36a-樣(RPL36AL)
白色短單胞菌prox-1抗體Anti-CD55 Antibody(PB0508)60S核糖體蛋白L17(RPL17)
荷葉離褶傘(都不提供)周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體Anti-CD59 Antibody5脂加氧(5-LO/LOX)
芽孢桿菌蛋白激R抗體Anti-Cd63 Antibody5羥乙(5-HIAA)
黃曲霉胰脂肪抗體Anti-CD63 Antibody(PB0236)5-羥色受體6(HTR6)
粉質(zhì)棒束孢前列腺E2受體2抗體Anti-CD68 Antibody5羥色(5-HT)
豇豆慢生根瘤菌蛋白體激活因子PA28γ抗體Anti-CD68 Antibody5羥基乙(5-HIAA)
釀酒酵母受磷蛋白/心臟磷蛋白抗體Anti-CD68 Antibody5羥二十碳四烯(5-HETE)
粘質(zhì)沙雷氏菌肽聚糖識(shí)別蛋白1抗體Anti-CD7 Antibody5核苷(5-NT)
芽孢桿菌屬前脹亡受體誘導(dǎo)膜損傷蛋白抗體Anti-CD7 Antibody5'-AMP活化蛋白激α-2催化亞基(PRKAA2)
白地霉多腺苷二磷多聚3抗體/多聚ADP-核糖聚合3Anti-CD69 Antibody4-羥基壬烯(HNE)
短小芽孢桿菌多腺苷二磷多聚4抗體/多聚ADP-核糖聚合4Anti-CD7 Antibody40S核糖體蛋白S19(RPS19)
膠孢聚腺苷養(yǎng)結(jié)合蛋白4抗體Anti-CD72 Antibody3氧代5α類固4脫氫2(SRD5A2)
富士山紅酵母肝再生磷酯2抗體Anti-CD71(TFRC) Antibody3型1-磷鞘受體(S1P3)
枯草芽孢桿菌蛋白Z抗體Anti-CD72 Antibody3-硝基酪(3-NT)
猴頭菇Hericium│erinaceus (Bull.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
草木樨中華根瘤菌Ensifer│meliloti (Dangeard) Young 質(zhì)量規(guī)格:0.98
微管蛋白聚合抑制劑(D8-MMAE)康寧木霉 肉湯培養(yǎng)基II群禽腺病4型抗體Elisa
Paenibacillus agarexedens 瓊脂培養(yǎng)基J坦布蘇病E蛋白Elisa
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 瓊脂培養(yǎng)基K乙型肝炎E抗原Elisa
桔青霉 瓊脂培養(yǎng)基L乙型肝炎病表面抗原Elisa
種中心 生活飲用水總大腸群質(zhì)控樣品(多管發(fā)酵法) 瓊脂培養(yǎng)基M谷轉(zhuǎn)氨Elisa
樟疫霉 瓊脂培養(yǎng)基N疫里默氏桿抗體Elisa
蘇云金芽孢桿 瓊脂培養(yǎng)基O糖皮質(zhì)Elisa
雅致放射毛霉 培養(yǎng)基P生長(zhǎng)Elisa
裂褶 培養(yǎng)基Q褪黑Elisa
魯考弗美奇酵母 培養(yǎng)基R病性肝炎抗體Elisa
類諾卡氏 鳥(niǎo)氨酸脫羧-O157生化鑒定髓樣分化因子88Elisa
動(dòng)球 棉子糖發(fā)酵管-O157生化鑒定轉(zhuǎn)錄因子Elisa
巴斯德畢赤酵母 肉湯培養(yǎng)基A核因子κBElisa
孢小克銀漢霉輪生變種 瓊脂培養(yǎng)基B腸炎病Elisa
蘇云金芽孢桿云南亞種 瓊脂培養(yǎng)基C瘟病Elisa