以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: 乳酸脫氫酶染色,主要顯示H型(LDH1) 注意事項(xiàng): 主要由四氮唑藍(lán)孵育液、陰性對(duì)照組成。染色后酶活性部位呈藍(lán)紫色沉淀。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
木栓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nobiletin絲裂原活化蛋白激激激4抗體包裝50g
木通乙苷B;荷苞花苷B英文名稱: Toosendanin神經(jīng)分化因子6抗體包裝100g
木犀草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetramethylpyrazine同源盒蛋白Meis2抗體包裝25g
木犀草-7-O-葡萄糖苷英文名稱: TetramethylpyrazineMeteorin神經(jīng)膠質(zhì)分化調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g
木犀草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Asperosaponin Ⅵ棕櫚?;さ鞍?抗體包裝1g
木香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dipsacoside B腦蛋白239抗體包裝5g
木香烴內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Irisflorentin同源盒蛋白MEIS3抗體包裝1g
苜蓿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ononin顆粒分化蛋白抗體包裝25g
耐斯糖;蔗果四糖三合物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eleutheroside E單氧化A+B抗體包裝5g
南板藍(lán)根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ciwujianoside B膜蛋白相互作用蛋白R(shí)GS16抗體包裝1g
南鶴虱(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Octyl acetate膜型絲蛋白2抗體包裝250 mg
南沙參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Plantamajoside多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體包裝1g
南山楂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DaidzinMob1同源蛋白MOBKL2B抗體包裝5g
南五味子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ChrysophanolMob1同源蛋白MOBKL2C抗體包裝100g
鬧羊花II英文名稱: Emodin復(fù)合型表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝1g
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BS抗?fàn)钕龠^(guò)氧化物抗體試劑盒大黃葡萄糖苷;
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:BS抗型肝炎病抗體IgM試劑盒;Digoxin
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BS抗型肝炎病抗體IgG試劑盒L-蛋;L-Methionine
乳酸脫氫酶染色液(H型,四唑鹽法)平菇 Boc-O-甲基-D-絲氨酸Pim-2原癌基因Elisa
地衣芽孢桿 O-甲基-D-絲氨酸鹽酸鹽pro-MMP-9Elisa
迂回殼囊孢 (R)-2-氨基-3-甲氧基酸鹽酸鹽PTEN;MMAC1Elisa
香菇 1-芐基-4-(甲基)-1H-吡唑鹽酸鹽P物質(zhì)Elisa
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) 4-異氧基-3-甲氧基苯乙P選擇Elisa
雙環(huán)林地蘑菇 3-羥基吡咯烷鹽酸鹽Qa抗原2Elisa
地衣芽胞桿 (2R)-1-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]-2-甲酸RAS癌基因家族成員RAB5aElisa
后藤假絲酵母 N-芴甲氧羰基-BETA-叔丁基-L-天冬氨酸五氟苯酯R-脊椎蛋白2Elisa
大腸桿 6--5-氟甲酸吡啶S100B蛋白Elisa
詹氏酸桿 3-氟-5-羥基S100蛋白Elisa
釀酒酵母 L-硫代脯氨酸乙酯鹽酸鹽S100鈣結(jié)合蛋白A4Elisa
鏈格孢 2-氨基-4-異基-5-溴S100鈣結(jié)合蛋白A8Elisa
厚垣孢普可尼亞 3-氨基-4-氟苯S100鈣結(jié)合蛋白A8;A9復(fù)合物Elisa
露濕漆斑 2--4-氟苯磺酰S100鈣結(jié)合蛋白A9Elisa
乳酸片球 2--4-氟甲酯SH3YL1Elisa