以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Rosiglitazone(BRL-49653C)馬來(lái)酸鹽是PPARγ高親和性激動(dòng)劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):155141-29-0 別名:BRL 49653C 純度:99.25% 分子式:C??H??N?O?S 分子量:473.5 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
啤酒神金黃桿菌葡萄糖合成2抗體Human THAP2 ELISA Kit大鼠磷蛋白關(guān)聯(lián)鞘糖脂微區(qū)1(PAG1)免疫試劑盒
盾殼霉谷草轉(zhuǎn)2抗體Human THG1L ELISA Kit大鼠淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌葡萄糖-6磷脫氫抗體Human THEM4 ELISA Kit大鼠淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒
黑曲霉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體Human THNSL2 ELISA Kit大鼠亮酰基肽(LAP)免疫試劑盒
白僵菌葡萄糖合成1抗體Human THOC1 ELISA Kit大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)免疫試劑盒
果生鏈核盤(pán)菌G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Human TGIF2LX ELISA Kit大鼠粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
木賊鐮孢甘油激3抗體Human THOC2 ELISA Kit大鼠類固5α還原1(SRD5A1)免疫試劑盒
唾液乳桿菌高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體Human TGM4 ELISA Kit大鼠類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒
泡囊短波單胞菌磷化谷受體1抗體Human TFDP2 ELISA Kit大鼠酪羥化(TH)免疫試劑盒
康氏木霉G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human TFDP1 ELISA Kit大鼠酪蛋白激JAK3(Jak3)免疫試劑盒
pDC316磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1抗體Human SNX9(Sorting nexin-9) ELISA Kit大鼠克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒
云芝磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1Human TFE3 ELISA Kit大鼠可溶性腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑(sTWEAK)免疫試劑盒
灰樹(shù)花孔菌葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白抗體Human TFEB ELISA Kit大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)免疫試劑盒
土壤薄層菌GTP結(jié)合蛋白10抗體Human TFEC ELISA Kit大鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒
總狀毛霉磷化Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human TFIP11 ELISA Kit大鼠可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)免疫試劑盒
Cerrena unicolorRas GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human TFPT ELISA Kit大鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒
鮭色諾卡氏菌Nocardia│salmonicolor 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%(T)異蓮心堿
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%綿馬ABA
秦氏蜜環(huán)菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜級(jí)大黃-8-β-D-吡喃葡萄糖苷
PPARγ激動(dòng)劑(Rosiglitazone maleate)地膚子皂苷Ic(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) oxalate hydrate卷曲蛋白FZD7抗體包裝25g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) sulfate, anhydrous口蹄疫病A型抗體包裝500g
地骨皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Creatinine磷化粘著斑激抗體包裝1g
地瓜藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Crocein scarlet 7B人纖維蛋白原抗體包裝5g
地黃(生地黃)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Crystal ponceau 6R鋅指蛋白798抗體包裝25g
地錦草(斑地錦)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cyclocytidine肽基脯酰順?lè)串悩?gòu)FKBP10抗體包裝5g
地錦草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytidine-5'-triphosphate (CTP), 3sodium肽基脯酰順?lè)串悩?gòu)FKBP11抗體包裝250g
地龍(參環(huán)毛蚓)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochalasin AFKBP135蛋白抗體包裝50g
地稔(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochalasin C肽基脯異構(gòu)FKBP25抗體包裝1g
地蜈蚣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochalasin D肽基脯異構(gòu)FKBP8抗體包裝250mg
地榆(地榆)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochalasin E磷化叉頭蛋白L2抗體包裝100g
地榆皂苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(+)-Camphoric acid叉頭蛋白N2抗體包裝25g
地榆皂苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(+)DBTA, Dibenzoyl-D-tartaric acid, monohydrate磷化叉頭蛋白家族1抗體包裝50MG
滇藏五味子G英文名稱: DATD, (+)-N,N'-Diallyltartramide磷化叉頭蛋白家族1抗體包裝1g
滇桂艾納香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DDSA, dodecenylsuccinic anhydrous旋轉(zhuǎn)異構(gòu)FKBP6抗體包裝250mg