商品介紹:
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
凸臍儒孢菌CD20抗體Human HEV-IgM(hepatitis E virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人鋅指蛋白R(shí)IZ(PRDM2)免疫試劑盒
古布爾班克氏菌屬12號染色體開放閱讀框40抗體Human SCRG1(Scrapie responsive protein 1) ELISA Kit人鋅指蛋白644(ZNF644)免疫試劑盒
鼠強(qiáng)對照液(乙乙酯介質(zhì))12號染色體開放閱讀框42抗體Human alpha 1 microglobulin ELISA Kit人鋅α2糖蛋白(AZGP1)免疫試劑盒
瓜果腐霉11號染色體開放閱讀框46抗體Human LAMTOR1(Ragulator complex protein LAMTOR1) ELISA Kit人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)免疫試劑盒
粗糙艾美耳球蟲11號染色體開放閱讀框67抗體Human EZH2(Enhancer of zeste homolog 2) ELISA Kit人心肌營養(yǎng)1(CT-1)免疫試劑盒
高盧蜜環(huán)菌11號染色體開放閱讀框77抗體Human HBcAb(hepatitis B virus Core antibody) ELISA Kit人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒
玫瑰變紅鏈霉菌11號染色體開放閱讀框16抗體Human PHF6(PHD finger protein 6) ELISA Kit人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)免疫試劑盒
云微所奇異球菌11號染色體開放閱讀框21抗體Human HAV-IgM(hepatitis A virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體免疫試劑盒
芽孢桿菌屬11號染色體開放閱讀框24抗體Human Cytochrome b-245 Beta Polypeptide ELISA Kit人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)免疫試劑盒
馬賽菌11號染色體開放閱讀框53抗體Human NADPH oxidase 5 ELISA Kit人心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)免疫試劑盒
林地蘑菇11號染色體開放閱讀框57抗體Human TRXR3(Thioredoxin reductase 3) ELISA Kit人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒
黑曲霉11號染色體開放閱讀框65抗體Human PARK2(E3 ubiquitin-protein ligase parkin) ELISA Kit人協(xié)同激分子受體(CMR)免疫試劑盒
優(yōu)美氈被孔菌11號染色體開放閱讀框71抗體Human MFN2(Mitofusin-2) ELISA Kit人小而密低密度脂蛋白(sLDL)免疫試劑盒
米根霉11號染色體開放閱讀框74抗體Human NT-proCNP(N-Terminal Pro-C-Type Natriuretic Peptide) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)免疫試劑盒
大豆擬莖點(diǎn)霉12號染色體開放閱讀框4抗體Human VDAC1(Voltage-dependent anion-selective channel protein 1) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)免疫試劑盒
乳桿菌屬12號染色體開放閱讀框24抗體Human ASMA(Anti Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)免疫試劑盒
匍柄霉Stemphylium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BREB病試劑盒根薯內(nèi)酯A
微小桿菌Microvirga│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BREB病試劑盒骨化三
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRE3泛蛋白連接TRIM68試劑盒骨化二
血栓素B2抑制劑(Triflusal)2-羥基-他英文名稱: 9-Bromo-10-phenylanthracene神經(jīng)特異蛋白酪磷N5抗體包裝25g
2-羥基阿托伐他汀 ?;?β-D-葡萄糖苷英文名稱: 2-Chloroanthracene足表達(dá)蛋白/轉(zhuǎn)錄因子21抗體包裝5g
2-羥基阿托伐他汀單鈉鹽二合物英文名稱: 9,10-Dichloroanthracene孕受體抗體包裝100g
2-羥基阿托伐他汀內(nèi)酯英文名稱: 1,5-Dibromoanthracene神經(jīng)突觸蛋白PCLO抗體包裝25g
2-羥基雌二英文名稱: 1,8-Diiodoanthracene早老γ分泌2抗體包裝100g
2-羥基雌英文名稱: 9-Phenylanthracene泛激1抗體包裝25g
2-羥基奈韋拉平英文名稱: N-Phenyl-9-anthramine泛激2抗體包裝500g
2-羥基炔雌英文名稱: 1-Iodonaphthalene泛激3抗體包裝25g
2-羥基英文名稱: Benz[a]anthracenep53調(diào)控PA26核蛋白抗體包裝5g
2-巰基嘌呤英文名稱: 1H-Cyclopenta[l]phenanthrene26S蛋白調(diào)節(jié)亞型S5a抗體包裝10g
2-去酰-2-基巴豆酰多烯紫杉(多烯紫杉雜質(zhì)...英文名稱: Cyclopenta[fg]tetracene-1,2-dione絲/蘇蛋白磷3B抗體包裝50g
2-去丁基-2-異戊基-5-基伊曲康唑英文名稱: Dibenz[a,h]anthracene蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移1α抗體包裝100g
2-去乙氧基-2-羥基-1氫-1-乙基坎地沙坦酯英文名稱: Dibenzo[b,def]chrysene泛連接抗體包裝25g
2-十八烯單甘油酯英文名稱: 1,2:8,9-DibenzopentacenePGBD3蛋白抗體包裝100ml
2-溴-卡比多巴英文名稱: Dibenzo[g,p]chrysene泛激4抗體包裝25ml