以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase-2活性測定試劑盒 | Caspase-2 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細(xì)胞caspase-2活性。測定原理基于Caspase-2特異水解其多肽底物N-acetyl-Val-Asp-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-VDVAD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應(yīng)于Caspase-2的水解活性。 細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個(gè)成員。Caspase-2也稱Ich-1或Nedd-2,在細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中被激活。 運(yùn)輸及保存:試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲存,1年內(nèi)穩(wěn)定。 所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定,但靈敏度略降。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
灰黃霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethionamide補(bǔ)體C1RL鏈多肽抗體包裝5g
灰黃霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Etravirine周期M2抗體包裝100g
回拉西坦;茴拉西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Famotidine周期T2抗體包裝25g
茴三硫(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Famotidine周期K抗體包裝5g
茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Febuxostat抗菌肽CAMP抗體包裝25g
肌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Febuxostat5號染色體開放閱讀框4抗體包裝5g
肌苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phenacetin4號染色體開放閱讀框44抗體包裝1g
肌酐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phenacetin4號染色體開放閱讀框33抗體包裝5g
?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fingolimod HCL /FTY-7204號染色體開放閱讀框42抗體包裝1g
吉非羅齊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fingolimod HCL /FTY-7205號染色體開放閱讀框33抗體包裝5g
吉莫斯特;吉美嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flufenamic acid9號染色體開放閱讀框89抗體包裝5mg
吉它霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flufenamic acid19號染色體開放閱讀框66抗體包裝1mg
己內(nèi)酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flumazenil21號染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
加巴噴?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flumazenil21號染色體開放閱讀框70抗體包裝25g
加替沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride胱抑A/半胱蛋白抑制劑A抗體包裝5g
里拉微球菌Micrococcus│lylae 質(zhì)量規(guī)格:>98%小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3試劑盒五味子酯;Schisantherin
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2試劑盒;Aconitine
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量>99.0%小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1試劑盒五味子;Schisandrin A
Caspase-2活性測定試劑盒秦氏蜜環(huán) 鄰苯二乙視網(wǎng)膜母瘤蛋白 1Elisa
泡盛曲霉 庚二酸二乙酯絲酸酮酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
枯草芽孢桿 1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸可溶性CD25Elisa
漢遜德巴利酵母漢遜變種 4-甲基噻唑-5-甲酸核苷二磷酸激AElisa
不解糖鞘氨單胞 苯基乙烯基亞砜低氧誘導(dǎo)因子1α抗體Elisa
棒曲霉 2,4,5-三氟甲酯白介1受體抗體Elisa
麻臉蘑菇 辛酸異戊酯前列腺Elisa
杏鮑菇 2-氨基-4-氟苯并噻唑幽門螺桿IgA抗體Elisa
炭黑曲霉 2-氨基-5-氯苯并噻唑L-羥脯氨酸Elisa
大腸埃希氏 3-氟-4-卵磷脂膽固?;D(zhuǎn)移Elisa
類芽孢桿屬 6-硝基藜蘆基質(zhì)Gla蛋白Elisa
亞細(xì)亞屬 2-氟-5-乙酸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽1Elisa
東方伊薩酵母 3,4,5-基肉桂酸甲酯天皰瘡抗體Elisa
根瘤 TAE684 (NVP-TAE684)NADPH氧化Elisa
青紫鏈霉 三單甲半胱氨酸蛋白8Elisa