以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Tazarotene是選擇性的視黃酸受體(RAR)激動(dòng)劑,用于治療斑塊性銀屑病和常見痤瘡。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):118292-40-3 純度:99.29% 分子量:351.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
(S)-鹽氮卓斯汀英文名稱: 9,9-Dimethyl-9H-9-silafluorene平足蛋白抗體(淋巴管內(nèi)皮蛋白)包裝1g
(S)-鹽英文名稱: 2,7-Dibromophenanthrene-9,10-dione蛋白磷酯-1B抗體包裝5g
(S)-鹽樂卡地平英文名稱: Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride蛋白質(zhì)磷-2A抗體包裝10g
(Z)-4-羥基它莫西芬英文名稱: 1,4,5,8-Naphthalenetetracarboxdiimide磷酯-2Ac抗體包裝50g
(±)-吡格雷鹽鹽英文名稱: 3,4,9,10-Perylenetetracarboxylic Diimide磷化-絲裂原活化蛋白激p38抗體(P-p38 MAPK)包裝1g
(±)-柚皮英文名稱: SelenopheneD型-過氧化活化增生受體抗體包裝250mg
(α/β)-1-氧基英文名稱: 2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]過氧化活化增生受體γ抗體(PPARγ)包裝100ml
(順式)伏沙明英文名稱: 1,3,6,8-Tetrabromopyrene孕激受體抗體包裝25ml
1'-Epi 鹽吉西他濱英文名稱: 2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-bifluorenylidene脯羥化抗體包裝500ml
1'-Epi吉西他濱'-Dibenzoate英文名稱: Copper(II) Phthalocyanine (α-form)早老蛋白-1抗體包裝1g
1,1'-[(1-基乙基)亞基]二[3-[4-(2...英文名稱: Copper(II) Phthalocyanine (β-form)早老蛋白-1抗體包裝5g
1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-膽堿磷英文名稱: Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)早老蛋白-1抗體包裝100mg
1,3-二-(o-叔丁基二基硅烷)-Fmoc-D-赤...英文名稱: 3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin前列腺干抗原抗體包裝1g
1,3-二(芐氧基)-5-尿嘧啶英文名稱: 3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin突觸后密度蛋白95抗體包裝5g
1,3-二芐基-5-尿嘧啶英文名稱: 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)P選擇抗體包裝1g
除烴海桿狀菌Marinobacter│hydrocarbonoclasticus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品骨保護(hù)試劑盒D-棉籽糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
根霉Rhizopus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移pi基因試劑盒L-谷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus│firmus Bredemann and Werner 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR谷胱甘肽還原試劑盒楊鈉;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
RAR激動(dòng)劑(Tazarotene)自然殺傷激活受體相關(guān)蛋白DAP12抗體瑞舒伐他汀鈣/羅蘇伐他汀鈣(標(biāo)準(zhǔn)品) Azure B eosinate
無精癥缺失因4抗體塞克硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Limaprost
多能發(fā)育相關(guān)因4抗體塞來昔布,塞內(nèi)昔布(標(biāo)準(zhǔn)品) Azure II eosinate
鋅指蛋白DZIP1抗體噻奈普汀;噻奈普汀(標(biāo)準(zhǔn)品) Filipin complex from Streptomyces filipinensis
Notch信號(hào)通路Delta樣配體1抗體三(羥)甘(標(biāo)準(zhǔn)品) Rosuvastatin
同源轉(zhuǎn)錄因子DLX1抗體三雙脒(標(biāo)準(zhǔn)品) Sudan I/Solvent Yellow 14
Hsp90輔助伴侶分子CDC37抗體三間三酚(1,3,5-三氧)(標(biāo)準(zhǔn)品) Sudan II /Solvent Orange 7
肌營養(yǎng)不良蛋白抗體三化釓六水合物 Sudan3
金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1抗體三生(標(biāo)準(zhǔn)品) Sudan IV/Solvent Red 24