以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Src家族抑制劑(PP2) | PP2 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:PP2 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PP2是一種有效的ATP競爭性的選擇性Src家族抑制劑,抑制Lck和Fyn,IC50分別為4和5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:172889-27-9 別名:AGL 1879 純度:99.23% 分子式:C??H??ClN? 分子量:301.77 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母同源異型盒基因HLX1蛋白抗體Human SNX15 ELISA Kit大鼠白介32(IL-32)免疫試劑盒
霍氏瓶霉三羥基基合成1Human SNX18 ELISA Kit大鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒
釀酒酵母熱休克因子1抗體Human SNX19 ELISA Kit大鼠白介2可溶性受體β鏈(sIL-2Rβ)免疫試劑盒
漢遜德巴利酵母磷化熱休克因子1抗體Human SNX20 ELISA Kit大鼠白介2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)免疫試劑盒
疣孢青霉熱休克蛋白71抗體Human SNRPB ELISA Kit大鼠白介28B(IL-28B)免疫試劑盒
無花果擬盤多毛孢微絲相關(guān)蛋白hHBrk1抗體Human SMO ELISA Kit大鼠白介28A(IL-28A)免疫試劑盒
竹瘤座菌植烷酰羥化2抗體Human SNX22 ELISA Kit大鼠白介27(IL-27)免疫試劑盒
食用香料 折光指數(shù)、相對密度 A型流感病H9N1神經(jīng)型抗體Human SNAPC5 ELISA Kit大鼠白介26(IL-26)免疫試劑盒
鹽敏芽孢桿菌A型流感病H9N1血凝型抗體Human SMPDL3B(Sphingomyelin Phosphodiesterase Acid Like 3B) ELISA Kit大鼠白介23(IL-23)免疫試劑盒
多帶革孔菌人類狀瘤病33抗體Human SMPX ELISA Kit大鼠白介22(IL-22)免疫試劑盒
少根根霉A型病H1N1蛋白抗體Human SNAPIN ELISA Kit大鼠白介21(IL-21)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌甲型肝炎病聚蛋白VP1抗體Human SNCAIP ELISA Kit大鼠白介20(IL-20)免疫試劑盒
長雙歧桿菌長亞種造血干特異性蛋白抗體Human CALB1(Calbindin) ELISA Kit大鼠白介2(IL-2)免疫試劑盒
滑菇轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human SMNDC1 ELISA Kit大鼠白介1受體樣1(IL1RL1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌同源盒蛋白C6抗體Human SNAP29 ELISA Kit大鼠白介1受體拮抗劑(IL1Ra)免疫試劑盒
植物乳桿菌植物亞種同源盒蛋白C4抗體Human SMO ELISA Kit大鼠白介1可溶性受體Ⅱ(sIL-1RⅡ)免疫試劑盒
肺形側(cè)耳Pleurotus│pulmonarius 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
黎巴嫩珊瑚狀放線菌屬Actinocorallia│libanotica 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品芍藥內(nèi)酯苷
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.5%(GC)仙苷
Src家族抑制劑(PP2)粘膜鞘氨單胞 3,5-二溴苯酸戊型肝炎病IgM抗體Elisa
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS19 3',3'',5',5''-四溴酚酞乙酯血紅蛋白Elisa
孟氏假單胞 5(6)-羧基熒光琥珀酰亞酯血管內(nèi)皮生長因子Elisa
Leucobacter kyeonggiensis 3--4-氟苯甲低密度脂蛋白Elisa
Nocardioides simplex 2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光乙酰甲酯高密度脂蛋白Elisa
球孢枝孢 Fmoc-Ala-OH-15N鈣蛋白抑制蛋白Elisa
平菇 Fmoc-環(huán)亮氨酸組織蛋白BElisa
萎蔫短小桿 BOC-L-3-(3-吡啶基)-氨酸組織蛋白LElisa
蓋替隱球酵母 Fmoc-Thr(tBu)-OPfp泰勒蟲Elisa
空泡單胞 BOC-L-苯甘氨焦蟲Elisa
環(huán)形凸臍蠕孢 2,5-二溴-3-己基噻吩傳染性支氣管炎Elisa
枯草芽孢桿 4-(芴甲氧羰基氨基)丁酸傳染性動脈炎Elisa
葡萄座腔 雙(2,4,6-三)草酸酯肌紅蛋白Elisa
無二酸檸檬酸桿 N-Boc-3-甲鼻疽伯克霍德抗體Elisa
傳染性支氣管炎病 全反式視黃5羥色Elisa