商品介紹:
NU7026是一種新型特異性的DNA-PK抑制劑,IC50為0.23±0.01μM,也抑制PI3K,IC50為13±3μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):154447-35-5 別名:LY293646 純度:99.94% 分子量:281.31 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
桔青霉磷葡萄糖內(nèi)酯抗體Anti-CD19 Antibody(PB0404)B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)
多食鞘桿菌蛋白磷2C亞型α抗體Anti-CD1D AntibodyB淋巴抗原(CD20)
天牛微桿菌蛋白激C nu型抗體Anti-CD1A AntibodyBH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)
寡單胞菌磷化蛋白激C nu型抗體Anti-CD1C AntibodyBcl-2樣蛋白1(BCL2L1)
熱吸水鏈霉菌磷化磷脂酰肌激3催化亞單位3抗體Anti-CD1A AntibodyBcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)
釀酒酵母磷甘油脫氫抗體Anti-CD19 AntibodyA組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)
長谷川赤擔(dān)孢酵母磷化泌乳抗體Anti-CD1D AntibodyA組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)
莫哈韋芽孢桿菌半胱天冬-3原抗體Anti-CD2 AntibodyA激PRKA錨定蛋白12(Akap12)
釀酒酵母質(zhì)磷1抗體Anti-CD2 AntibodyAT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)
嗜熱液化芽孢桿菌維生D低磷性佝僂病蛋白Anti-Cd2 AntibodyATP(ATP)
山崗單胞菌多通道膜蛋白PTCHD2抗體Anti-CD22 AntibodyApelin12(AP12)
薄褐孔菌修補(bǔ)相關(guān)蛋白PTCHD3抗體Anti-CD209 AntibodyApelin 36(AP36)
蠟樣芽孢桿菌髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激抗體Anti-CD200 Antibodyapelin 13(AP13)
芽胞桿菌磷化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激抗體Anti-CD22 Antibody(PB0731)apelin 12(AP12)
釀酒酵母磷化血小板源性生長因子受體αAnti-CD209 AntibodyAP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)
石狀青霉磷化血小板源性生長因子受體αAnti-CD22 AntibodyAlpha-D 酚/維生E(Alpha-D TPL)
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
平菇Pleurotus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
DNA-PK抑制劑(NU7026)銀耳 我妻氏血平板9cm脂肪Elisa
黃疣倫茨氏 MI培養(yǎng)基肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移Elisa
松木層孔 NS培養(yǎng)基脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa
Arthrobacter TTC乳糖瓊脂脂肪酸脫飽和Elisa
礦泉水 鉛 營養(yǎng)鹽瓊脂葡萄糖激Elisa
美澳型核果褐腐病 肉湯培養(yǎng)基胰島Elisa
毛木耳 有機(jī)磷細(xì)培養(yǎng)基酰基氧化Elisa
赤曲霉 解磷細(xì)培養(yǎng)基乙酰酯Elisa
核青霉 糞腸球瓊脂蛋白激BElisa
枯草芽胞桿枯草亞種 MEM維持液線粒體呼吸鏈復(fù)合物IVElisa
畢赤酵母屬 3%尿線粒體呼吸鏈復(fù)合物IElisa
蘇云金芽孢桿 3%麥芽糖線粒體呼吸鏈復(fù)合物IIIElisa
新疆鹽紅 豬肺疫苗培養(yǎng)基線粒體呼吸鏈復(fù)合物IIElisa
陰溝腸桿 仔豬副傷寒培養(yǎng)基色P450Elisa
釀酒酵母 豬巴氏桿疫苗培養(yǎng)基磷酸化外信號(hào)調(diào)節(jié)激Elisa