以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Chelerythrine Chloride是一種有效的,細(xì)胞穿透的蛋白酶C(protein kinase C)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制劑,能夠抑制PKC活性,IC50值為660nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):3895-92-9 純度:98.0% 分子量:383.82 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
黑根霉銜接蛋白α-Adaptin抗體Human LYRM7 ELISA Kit小鼠幽門螺旋桿菌抗體(IgM)免疫試劑盒
粘性絲孢酵母凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)Human LYPLAL1 ELISA Kit小鼠幽門螺旋桿菌抗體(IgG)免疫試劑盒
黑曲霉凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)Human LYAR ELISA Kit小鼠印度猬因子(IHH)免疫試劑盒
冷溫木拉克酵母三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體Human LY6K ELISA Kit小鼠吲哚2,3-雙加氧1(IDO1)免疫試劑盒
長(zhǎng)枝木霉載脂蛋白E抗體Human LYN ELISA Kit小鼠音猬因子N端(Shh-N)免疫試劑盒
雞傷寒沙門氏菌淀粉樣肽前體蛋白抗體Human LYG1 ELISA Kit小鼠抑制B(INH-B)免疫試劑盒
彎孢菌水通道蛋白-2抗體Human LY96 ELISA Kit小鼠抑制A(INH-A)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌血管緊張?jiān)贵wHuman LYPLAL1 ELISA Kit小鼠抑瘤M(OSM)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌雄激受體抗體Human LYRM7 ELISA Kit小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)免疫試劑盒
茯苓死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)Human LYPLA1 ELISA Kit小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒
熒光假單胞菌軸蛋白1抗體Human LUC7L ELISA Kit小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌自噬相關(guān)蛋白9B抗體Human LUC7L2 ELISA Kit小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫試劑盒
放線纖維菌自噬相關(guān)蛋白12抗體Human LSM8 ELISA Kit小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)免疫試劑盒
藍(lán)色犁頭霉自噬相關(guān)蛋白13抗體Human LSM5 ELISA Kit小鼠乙酰 免疫試劑盒
休哈塔假絲酵母自噬相關(guān)蛋白3抗體Human LSP1 ELISA Kit小鼠乙酰膽堿酯(AChE)免疫試劑盒
連香樹迪茲氏菌整合樣金屬蛋白與凝血4型抗體Human LSM7 ELISA Kit小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)免疫試劑盒
小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分吡哆/吡哆維生B6磷試劑盒乙酰黃芪皂苷I
天津棒桿菌Corynebacterium│tianjin 質(zhì)量規(guī)格:BR吡哆/吡哆維生B6激試劑盒鹽去氫駱駝蓬堿
pCas(#62225)pCas(#62225) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鼻病試劑盒右旋四氫巴馬汀
MAPK抑制劑(Chelerythrine Chloride)化矢車菊,花青(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2’-OMe Cytidine肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體包裝5g
化纈草英文名稱: ibu-rG珠蛋白1抗體包裝1g
化血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bz-rC間充質(zhì)同源盒蛋白2抗體包裝25g
輪環(huán)藤根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bz-rAG蛋白偶聯(lián)受體MRGX1抗體包裝5g
羅布麻寧;香草乙;夾竹桃麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ac-dC黑色瘤相關(guān)抗原11抗體包裝1g
羅布麻葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ibu-dGG蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體包裝25g
羅漢果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: bz-dC麥芽糖結(jié)合蛋白抗體包裝5g
羅漢果苷III(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: bz-dA肌球蛋白XVIIIb抗體包裝1g
羅漢果苷IV(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trt-rUMAL蛋白抗體包裝5g
羅漢果黃英文名稱: Trt-dU麥芽糖孔蛋白抗體包裝100g
羅漢果皂苷Iva英文名稱: Trt-dT蕈堿樣蛋白3抗體包裝25g
羅漢果皂苷Ive(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DMT-5-I-dU巨噬清道夫受體1抗體包裝5g
羅漢果皂苷V(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DMT-2'-F-dU牛結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體包裝1g
羅漢果皂苷ⅡA2英文名稱: DMT-2'-OMe-UT成熟相關(guān)蛋白抗體包裝25g
羅漢果皂苷ⅢA1英文名稱: 5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC黑色瘤相關(guān)抗原D1抗體包裝5g