以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Mubritinib(TAK-165)是有效,選擇性的EGFR2/HER2抑制劑,IC50值為6nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):366017-09-6 別名:TAK-165 純度:99.45% 分子量:468.47 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
假單胞菌大鼠肌激同工MB ELISA KitAnti-KPBB Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)
緣彎孢小鼠L選擇Anti-KRT10 Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)
蒙氏假單胞菌豚鼠卵清蛋白特異性IgGAnti-KRT17 Antibody人抗呼吸道合胞病抗體(RSV)
新疆糖絲菌大鼠活化A受體抗體Anti-KRT13 Antibody人抗呼吸道合胞病抗體(RSV)
膜醭畢赤酵母豚鼠白介4Anti-KRT16 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)
大腸埃希氏菌大鼠腦紅蛋白Anti-KRT15 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)
絳紅褐鏈霉菌人原鈣黏1Anti-KRT10 Antibody人柯薩奇病IgM(Cox V-IgM)
帕莫斯托木層孔菌鮭魚降鈣Anti-KRT2 Antibody人柯薩奇病IgM(Cox V-IgM)
Rhizobium 兔白介6Anti-KRT20 Antibody人柯薩奇病IgG(Cox V-IgG)
根霉屬小鼠粘蛋白/粘液5BAnti-KRT38 Antibody人柯薩奇病IgG(Cox V-IgG)
金黃殼囊孢兔白介10Anti-KRT4 Antibody人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)
三叉爪鬼筆大鼠血小板生成Anti-KRT37/38 Antibody人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)
鷹嘴豆中間根瘤菌小鼠垂體腺苷環(huán)化激活肽Anti-KSR2 Antibody人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)
空腸彎曲桿菌小鼠γ干擾Anti-KRT77 Antibody人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)
珊瑚諾氏菌(珊瑚色諾氏菌,珊瑚紅諾氏菌,小原放線菌)人皮膚T虜獲趨化因子Anti-KSHV ORF57 Antibody人乙型肝炎病前S2抗體(HBV preS2Ab)
枯草芽孢桿菌豚鼠免疫球蛋白GAnti-L1/ORF2 Antibody人乙型肝炎病前S2抗體(HBV preS2Ab)
癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab25抗體地霉屬小鼠腎集合管細(xì)胞
胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白RLLM1抗體果香地霉人直腸腺癌細(xì)胞
RNA結(jié)合基因蛋白3抗體白地霉人膀胱移行細(xì)胞癌
雄激受體相關(guān)蛋白24抗體皺褶假絲酵母人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞系
EGFR2/HER2抑制劑(Mubritinib)副豬嗜血桿 Kushenol A
Enterococcus faecium Koaburaside
毛栓孔 Kelampayoside A
疣梗青霉 Kaempferol 7-O-rhamnoside
淺藍(lán)灰曲霉 Junipediol B 8-O-glucoside
糙皮側(cè)耳 Isotschimgin
*薔薇放線孢 Isotaxiresinol
熱淀粉鏈霉 Isolicoflavonol
柱孢犁頭霉 異石當(dāng)歸
釀酒酵母 異柯楠堿
蘋果雙殼 異橙皮內(nèi)酯
炭黑曲霉 Isohemiphloin
鴨疫里氏桿 Isochamaejasmin
米曲霉 異水菖蒲二
漢遜德巴酵母 Iriflophenone 3-C-glucoside