以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
BMS-509744是有效的,選擇性的Itk激酶抑制劑,IC50值為19nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):439575-02-7 純度:98.02% 分子量:623.83 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
波羅的海萊茵海默氏菌頂體前體蛋白抗體Human MBIP ELISA Kit小鼠中性粒彈性蛋白(NE)免疫試劑盒
擬莖點(diǎn)霉黑色瘤缺失樣蛋白1抗體Human MARS ELISA Kit小鼠脂氧A4(LXA4)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌未知糖基化轉(zhuǎn)移AER61抗體Human MARVELD2 ELISA Kit小鼠脂聯(lián)(ADP)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌鐵蛋白Fe65抗體Human MAEA ELISA Kit小鼠脂肪合成(FASN)免疫試劑盒
貪噬菌屬抑癌基因ras同源家族1抗體Human MARVELD3 ELISA Kit小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體Human MAGEA10 ELISA Kit小鼠脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒
釀酒酵母心鈉抗體Human MAGEA1 ELISA Kit小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2(Lp-PLA2)免疫試劑盒
黑曲霉酰tRNA合成2抗體Human MAGEA11 ELISA Kit小鼠脂蛋白α(Lp-α)免疫試劑盒
冬菇絲抑制蛋白激C底物抗體Human MAGEA3(Melanoma-associated antigen 3) ELISA Kit小鼠正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)免疫試劑盒
木糖葡糖醋桿菌*核突觸蛋白α抗體Human MAGEA4 ELISA Kit小鼠整合αM(Itgam/CD11b)免疫試劑盒
食紅球菌自噬相關(guān)蛋白4B抗體Human MAGEA6 ELISA Kit小鼠整合α-IIb(Itga2b/CD41)免疫試劑盒
嗜線蟲(chóng)致病桿菌整合樣金屬蛋白與凝血1型-12抗體Human MAGEA8 ELISA Kit小鼠整合α5(Itgax/CD11c)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌α-輔肌動(dòng)蛋白4(內(nèi)參)抗體Human MAGEB1 ELISA Kit小鼠粘蛋白/粘液7(MUC7)免疫試劑盒
裂褶菌堿性磷抗體Human MAGI1 ELISA Kit小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)免疫試劑盒
棒彎孢AU1 tag標(biāo)簽抗體Human MAGIX ELISA Kit小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC) 免疫試劑盒
Phoma medicaginis var. medicaginis脂肪增強(qiáng)結(jié)合蛋白1Human MAGEB18 ELISA Kit小鼠粘蛋白/粘液2(MUC2)免疫試劑盒
糙皮側(cè)耳Pleurotus│ostreatus 質(zhì)量規(guī)格:15U/mg,進(jìn)口表達(dá)于SiSo系的受體結(jié)合型腫瘤抗原試劑盒2-O-乙酰山椒子烯
型副傷寒沙門菌Salmonella│paratyphi A 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分變腎上腺試劑盒柚皮-7-O-葡萄糖苷
: =IFO14056資源名稱: 印度斯坦鏈異壁菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR鞭毛蛋白試劑盒茵芋堿
Itk激酶抑制劑(BMS-509744)龍血竭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole微小染色體維持缺陷蛋白7抗體包裝25g
龍血A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazoleE3泛連接MUL1抗體包裝5g
龍芽楤木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體包裝5g
龍眼肉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-Quinuclidinone HCl肥大類糜蛋白1抗體包裝5MG
漏蘆(祁州漏蘆)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Irsogladine硝唑單克抗體包裝100g
蘆丁/蕓香葉苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ADA monosodium salt線粒體核糖體蛋白L12抗體包裝25g
蘆根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ADA disodium salt線粒體核糖體蛋白L39包裝1g
蘆薈(好望角蘆薈)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ADA脫氫激1抗體包裝250mg
蘆薈大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S)-N-Fmoc-2-(4'-pentenyl)alanine絲裂原活化的蛋白激p38β抗體包裝5g
蘆薈苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Prednisolone phosphate sodium核基質(zhì)蛋白3抗體包裝1g
蘆薈苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DMT-CL組織相容性復(fù)合體蛋白1抗體包裝5g
蘆薈新甙D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-Phenylbenzohydroxamic Acid;Tantalon組織相容性復(fù)合體蛋白2抗體包裝1g
蘆筍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Chloroguanosine轉(zhuǎn)化因子樣蛋白4抗體包裝250mg
蘆竹根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ITP•Na3NADH復(fù)合體5抗體包裝5g
蘆竹堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GTP.Na2肌微管1抗體包裝1g