以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
COX-2抑制劑(NS-398) | NS-398 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
NS-398是一種COX-2抑制劑,100μM NS-398*不影響COX-1活性,而抑制COX-2活性,IC50值是3.8μM,抑制作用呈濃度依賴性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):123653-11-2 純度:99.79% 分子量:314.36 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
(R)-(-)-布洛芬 (S)-(+)-賴英文名稱: 3',5'-Dibromo-4'-hydroxyacetophenone磷化p21激活激1抗體包裝5g
(R)-4-羥基鹽心得安英文名稱: 3,5-Dihydroxybenzamide磷化3磷肌依賴性蛋白激1抗體包裝1g
(R)-5-羥基托特羅定英文名稱: 3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde磷化3磷肌依賴性蛋白激1抗體包裝5g
(R)-7-乙基喜樹(shù)堿英文名稱: Hexaphenylbenzene磷化3磷肌依賴性蛋白激1抗體包裝25g
(R)-9-(2-羥基)腺嘌呤英文名稱: 1,3,5-Tris(4-carboxyphenyl)benzene磷化磷酯Cγ1抗體包裝5g
(R)-9-[2-基氧基)-N6-酰腺嘌呤英文名稱: 1,3,5-Tris(bromomethyl)benzene磷化磷酯Cγ2抗體包裝1g
(R)-N-去乙基奧昔布寧鹽鹽英文名稱: Naphthacene磷化樁蛋白Paxillin抗體包裝250mg
(R)-O,O-二(叔丁基二硅烷基)去氧腎上腺英文名稱: Naphthacene (purified by sublimation)磷化樁蛋白Paxillin抗體包裝1g
(R)-O-去基萘普生英文名稱: Pentacene (purified by sublimation)磷化樁蛋白Paxillin抗體包裝5g
(R)-地平英文名稱: Pigment Blue 15 (purified by sublimation)磷化蛋白激C β1/β2(Thr500)抗體包裝1g
(R)-奧美拉唑鈉鹽英文名稱: Phthalocyanine (purified by sublimation)孕激受體膜相關(guān)元件抗體包裝5g
(R)-奧昔布寧化物英文名稱: Picene (purified by sublimation)磷化P63腫瘤抑制基因抗體包裝100g
(R)-比卡魯英文名稱: 5,6,11,12-Tetraphenylnaphthacene (purified by sublimation)磷化P63腫瘤抑制基因抗體包裝25g
(R)-比卡魯 (1S)-樟腦酯英文名稱: 1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-Hexadecafluorophthalocyanine Copper(II) (purified by sublimation)蛋白甘露糖基轉(zhuǎn)移1抗體包裝5g
(R)-布洛芬英文名稱: 3,4,9,10-Perylenetetracarboxylic Dianhydride磷化嗜中性粒胞漿因子4抗體包裝1g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR骨特異性堿性磷B試劑盒L-色;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
青霉屬菌Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品骨髓抑制因子1試劑盒托品;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品骨橋試劑盒鈉;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)
COX-2抑制劑(NS-398)紫花前胡苷元Human
紫花前胡Human, Mouse
紫金蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
紫金龍(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
紫蓳靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
紫荊皮(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
紫萁(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
紫色姜(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
紫杉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse