商品介紹:
本試劑盒為動物細胞死活檢測提供了雙色熒光染色方法。本試劑盒采用兩種廣泛常用的熒光探針,通過檢測細胞內(nèi)酯酶活性和質(zhì)膜完整性兩個方面反映細胞活力。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光多孔板、掃描儀、流式細胞儀以及其他熒光檢測系統(tǒng)。本試劑盒可以應用于大多數(shù)的真核哺乳動物細胞,包括貼壁細胞核某些組織,但不適用與細菌、酵母。該方法更快捷安全且靈敏度更高。 原理:在鈣黃素AM 存在活細胞內(nèi)時,其特點就是由于胞內(nèi)的酯酶活性作用,由幾乎無熒光、具有細胞膜透性的鈣黃素AM生成具有強烈熒光信號的綠色熒光物質(zhì)(Ex/Em:495nm/520nm)。而對于受損的細胞膜來說,碘化丙啶(PI)可以傳過進入細胞,與核酸結合,熒光信號從而放大40 倍,產(chǎn)生一個明亮的紅色熒光信號的死細胞(Ex/Em:530nm/620nm)。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒 | Live & Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells | 1000T | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
胰島樣生長因子結合蛋白6(IGFBP6)英文名稱:IGFBP6 ELISA Kit磷化EGF應答因子1抗體包裝25g
胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP4)英文名稱:IGFBP4 ELISA Kitβ抗體包裝5g
胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP3)英文名稱:IGFBP3 ELISA Kit磷化BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體包裝25g
胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)英文名稱:IGFBP2 ELISA KitARF鳥苷交換因子BIG1抗體包裝5g
胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP1)英文名稱:IGFBP1 ELISA Kit腦特異性同源蛋白BSX抗體包裝1g
胰島樣生長因子2(IGF2)英文名稱:IGF2 ELISA Kit鋅指蛋白47抗體包裝25g
胰島樣生長因子1(IGF1)英文名稱:IGF1 ELISA Kit?BTBD14A蛋白抗體包裝5g
胰島樣蛋白6(INSL6)英文名稱:INSL6 ELISA Kit鋅指蛋白851抗體包裝25g
胰島樣蛋白5(INSL5)英文名稱:INSL5 ELISA Kit嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體包裝5g
胰島樣蛋白3(INSL3)英文名稱:INSL3 ELISA Kit磷化c-fos抗體包裝100g
胰島受體底物2(IRS2)英文名稱:IRS2 ELISA Kit磷化c-fos抗體包裝25g
胰島受體底物1(IRS1)英文名稱:IRS1 ELISA Kit磷化原癌基因c-Jun抗體包裝500g
胰島受體(ISR)英文名稱:ISR ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝5ml
一氧化氮合運輸因子(NOSTRIN)英文名稱:NOSTRIN ELISA Kit1號染色體開放閱讀框148抗體包裝1g
葉受體1(FOLR1)英文名稱:FOLR1 ELISA Kit性T抗原-4抗體包裝5g
去整合樣金屬蛋白23抗體白介21(IL21)MK-801 (Dizocilpine) is a potent N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonist
細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒球孢毛霉 2-吡啶甲酰視黃酸檢測試劑盒
類芽胞桿 2,5-二溴-3-氯吡啶視錐蛋白樣蛋白1檢測試劑盒
腐霉 噻唑-5-甲酸嗜鉻粒蛋白A檢測試劑盒
芽孢桿屬 咪唑-2-甲酸嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素A檢測試劑盒
側(cè)耳 2-巰基嘧啶嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素B檢測試劑盒
果生鏈核盤 (3,5-二甲基吡唑-1-基)乙酸嗜酸粒趨化蛋白Eotaxin 1檢測試劑盒
貝倫格葡萄座腔 坎地沙坦酯嗜酸活化趨化因子3檢測試劑盒
大腸埃希氏 1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸嗜酸性粒趨化蛋白檢測試劑盒
微黃漢納酵母 2--9,9-二甲基芴嗜酸性粒趨化蛋白檢測試劑盒
豬丹絲 4-溴-3-甲酸乙酯嗜酸性粒陽離子蛋白檢測試劑盒
硬結節(jié)桿 2-溴-5-氯甲苯嗜異性抗體檢測試劑盒
大腸桿屬 2,5,6-三氨基-4-磺酸基嘧啶受體TNFRSF結合絲氨酸蘇氨酸激酶2檢測試劑盒
pcDNA6/V5-His A 2,8-二氯喹啉-3-甲瘦素檢測試劑盒
叢花青霉 N-甲基-1-萘瘦素受體檢測試劑盒
棉花新鞘氨 2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸舒檢測試劑盒