以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
XCT-790是雌激素相關(guān)受體(ERR)α反向激動劑,能誘導(dǎo)抗性的癌細(xì)胞死亡。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:725247-18-7 純度:98.01% 分子量:596.42 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
尖孢鐮孢核轉(zhuǎn)錄因子25抗體Anti-IL33 Antibody羧肽A4(CPA4)
蝙蝠蛾擬青霉微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IL33 Antibody羧肽A3(CPA3)
泡盛曲霉酪激A/B/C抗體Anti-IL34 Antibody羧酯5A(CES5A)
釀酒酵母新型抑癌基因抗體Anti-IL36A Antibody羧酯4A(CES4A)
釀酒酵母轉(zhuǎn)鐵蛋白/血清鐵傳遞蛋白抗體Anti-IL36A Antibody羧酯3(CES3)
大腸埃希氏菌腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體Anti-IL3RA Antibody羧酯2(CES2)
混料芽孢桿菌腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體Anti-IL4 Antibody羧酯1(CES1)
麥根腐平臍蠕孢腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體Anti-IL3RA Antibody羧基端結(jié)合蛋白2(CTBP2)
黑木耳腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體Anti-IL4 Antibody髓樣前體抑制因子2(MPIF2)
細(xì)孢毛霉磷化血管生成受體2抗體Anti-IL4 Antibody髓樣前體抑制因子1(MPIF1)
球孢白僵菌轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-IL4 Antibody髓核分化抗原(MNDA)
木賊鐮孢菌磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-IL4 Antibody髓觸發(fā)受體2(TREM2)
仙人掌有孢漢遜酵母磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-IL4R Antibody髓觸發(fā)受體1(TREM1)
薔薇生鏈格孢磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-IL4R Antibody髓觸發(fā)受體1(IREM1)
異常畢赤酵母磷化血管生成受體2抗體Anti-IL4R Antibody髓鞘型脂肪結(jié)合蛋白(FABP8)
大麗輪枝孢磷化色羥化抗體Anti-IL4R Antibody髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白(MOG)
富含亮重復(fù)蛋白SHOC2抗體植物乳桿菌(胚芽乳桿菌)小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞
蛙皮降壓肽抗體B組鏈球菌小鼠淋巴成纖維細(xì)胞
缺氧誘導(dǎo)基因95抗體腸道致病性大腸埃希氏菌小鼠乳腺上皮細(xì)胞
核突觸蛋白β抗體法國蜜環(huán)菌(斜面)小鼠甲狀腺上皮細(xì)胞
ERRα反向激動劑(XCT-790)馬來西亞鏈霉 鋇,鈣,,鎂,鈉,鋰,銨,鍶/Ba, Ca, K, Mg, Na, Li, NH4+, Sr蛋白Elisa
緊密毛霉 鑭、鈰、鐠、釹、釤、釓、鉺、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm, Gd, Er, Yb脂肪Elisa
傘狀霉屬 鑭、鈰、鐠、釹、釤、釓、鉺、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm, Gd, Er, Yb淀粉Elisa
酮叢毛單胞 鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm, Eu, Gd, Y黑色抗體Elisa
糖化酵母 鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm, Eu, Gd, Y彈性蛋白Elisa
黃傘 鉻、鐵、錳、鎳、鉛、錫、鈦、鋯/Cr, Fe, Mn, Ni, Pb, Sn, Ti, Zr總膠原蛋白Elisa
胡椒枯萎病 鉻、鐵、錳、鎳、鉛、錫、鈦、鋯/Cr, Fe, Mn, Ni, Pb, Sn, Ti, Zr超氧化物歧化Elisa
易變?nèi)墙湍?/span> 鉻、鐵、錳、鎳、鉛、錫、鈦、鋯/Cr, Fe, Mn, Ni, Pb, Sn, Ti, Zr尿苷二磷酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移1Elisa
巴氏醋桿羅旺亞種 鉻、鐵、錳、鎳、鉛、錫、鈦、鋯/Cr, Fe, Mn, Ni, Pb, Sn, Ti, ZrN-甲基-D-天冬氨酸受體Elisa
孢淡灰鏈霉 鉻、鐵、錳、鎳、鉛、錫、鈦、鋯/Cr, Fe, Mn, Ni, Pb, Sn, Ti, Zr神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白Elisa
多根硬皮馬勃 鉻、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鈦、鋅/Cr, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni, Ti, Zn雌二Elisa
大孢硬皮馬勃 鉻、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鈦、鋅/Cr, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni, Ti, Zn睪酮Elisa
釀酒酵母 鉻、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鈦、鋅/Cr, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni, Ti, Zn血管內(nèi)皮生長因子Elisa
大腸埃希 鉻、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鈦、鋅/Cr, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni, Ti, Zn堿性成纖維生長因子Elisa
異常漢遜酵母 鉻、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鈦、鋅/Cr, Cu, Fe, Mn, Mo, Ni, Ti, Zn基質(zhì)金屬蛋白9Elisa