商品介紹:
Tacrolimus結(jié)合到FK506結(jié)合蛋白(FKBP)形成復(fù)合體,復(fù)合體抑制鈣調(diào)磷酸酶(PP2B)。Tacrolimus是一種mTOR非依賴性的自噬誘導(dǎo)劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):104987-11-3 別名:Fujimycin;FR900506;FK506 純度:98.46% 分子量:804.02 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
鴨跖草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Analgin孤兒核受體TAK1抗體包裝25g
亞硫氫鈉穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Empagliflozin; BI-10773骨巢蛋白抗體包裝5g
亞麻木酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: BQ-123軸突生長誘向因子5抗體包裝1g
煙堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: diatrizoic acid磷化p-IκB-α抗體包裝25g
延胡索(元胡)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GlycopyrrolateG21蛋白質(zhì)抗體包裝5g
延胡索(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfanilamide醌氧化還原抗體包裝10g
延胡索乙;消旋延胡索乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadiazine神經(jīng)肽Y1受體抗體包裝50g
延齡草苷;地索苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadiazine谷受體1抗體包裝25g
芫花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Norgestrel谷受體調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝5g
芫花條(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dorsomorphin 2HCl;BML275.HCL;Compound C解1抗體包裝5g
巖白菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methimazole神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白抗體包裝5g
巖大戟內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Clomiphene citrate核孔蛋白50抗體包裝100g
巖黃連(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dihydroergotoxine mesylate軸索過度生長抑制因子-A抗體包裝25g
鹽巴馬汀,鹽掌葉防己堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Aldehydoisoophiopogonanone A一氧化氮合成-1抗體(神經(jīng)型)包裝5g
鹽川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlorprothixene一氧化氮合成-3(內(nèi)皮型)抗體包裝100g
污黑腐皮殼Valsa│sordida Nitschke 質(zhì)量規(guī)格:M.W12000,進(jìn)口BASF分包睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子試劑盒重樓皂苷Ⅶ;Polyphyllin VI
友好戈登氏菌Gordonia│amicalis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR結(jié)核菌試劑盒重樓皂苷Ⅵ;Polyphyllin VI
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR結(jié)核菌桿抗體IgM試劑盒重樓皂苷II;Chonglou Sapo
PP2B抑制劑(Tacrolimus)腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗原3',4',7-三羥黃(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗原3'-氧葛根Human
激受體相關(guān)蛋白/孤兒受體相關(guān)蛋白(抗原)3'-牻牛兒-3-異戊烯-5,7,2',4'-四羥...Human
有死亡區(qū)的腫瘤壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗原3'-羥葛根Human
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗原3'-羥紫檀茋Human, Mouse, Rat
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2抗原3,29-二酰栝樓仁三(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗原3,3'-二鞣花-4'-O-葡萄糖苷Human
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗原3,6-二芥子酰蔗糖(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡2配體抗原3-(3-羥)(標(biāo)準(zhǔn)品)Human