以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
DASA-58是一種高度特異的小分子PKM2激動(dòng)劑,DASA-58抑制LPS誘導(dǎo)的HIF-1α和IL-1β,以及一系列其它Hif-1α依賴基因的表達(dá)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1203494-49-8 純度:98.01% 分子量:453.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
卡利比克畢赤酵母軸突蛋白3抗體Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)
長(zhǎng)根菇1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框63抗體Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激1(Tie-1)
榨菜檸檬球菌神經(jīng)元特異性蛋白家族成員2抗體Human IL-15(Interleukin 15) ELISA Kit含SET域4(setd4)
粘紅酵母神經(jīng)前體發(fā)育下調(diào)蛋白4抗體Human IL-29(Interleukin 29) ELISA Kit含patatin樣磷脂域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)
天藍(lán)色鏈霉菌*泛結(jié)合E2F抗體Human ACTα1(Actin Alpha 1, Skeletal Muscle) ELISA Kit過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物(LPO)
草鹽貪銅菌鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)
梭菌神經(jīng)4抗體Human IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)
生金鏈霉菌N-乙?;咸烟羌た贵wHuman IL-17E/IL-25(Interleukin 25) ELISA Kit過(guò)氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)
硝孢鏈霉菌核因子1B抗體Human IL-1alpha(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit過(guò)氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)
雜色曲霉原變種維甲誘導(dǎo)神經(jīng)母瘤蛋白1抗體Human IGFBP-1(Insulin-like growth factor-binding protein 1) ELISA Kit過(guò)氧化氫(CAT)
釀酒酵母轉(zhuǎn)錄延伸因子NELF抗體Human IL-1beta(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit過(guò)敏/補(bǔ)體片斷4(C4a)
多根硬皮馬勃蛋白激C結(jié)合蛋白NELL1抗體Human IL1R1(Interleukin 1 Receptor Type I) ELISA Kit果糖二磷縮A(ALDOA)
米氏假單胞菌蛋白激C結(jié)合蛋白NELL2抗體Human IGFBP-2(Insulin-like growth factor-binding protein 2) ELISA Kit果糖(FRA)
大豆慢生根瘤菌腦特異性跨膜蛋白抗體Human GAL9(Galectin-9) ELISA Kit果糖1,6二磷縮(FDA)
德?tīng)柌加墟呓湍负艘蜃?/span>1A抗體Human IL1R2(Interleukin 1 Receptor Type II) ELISA Kit廣譜角蛋白(P-CK)
大西洋交替紅色桿菌環(huán)一螺旋蛋白1抗體Human G-CSF(Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit胱抑SN(CST1)
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR秦皮
: AS2.114資源名稱: 羅倫隱球酵母 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR黃芩
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR野
小分子PKM2激動(dòng)劑(DASA-58)杰氏假單胞 N,O-雙(基硅烷基)三氟乙酰5核苷酸Elisa
凍干粉 志賀氏(陰性) 膽汁肉湯5羥色Elisa
爪哇根霉 40%膽汁肉湯6酮前列腺F1aElisa
黑曲霉 雙歧桿培養(yǎng)基8羥基脫氧鳥(niǎo)苷Elisa
釀酒酵母 1-(3-氨基)-2-甲基8-異前列腺F2αElisa
寄生孢 營(yíng)養(yǎng)肉汁Ⅰ型膠原C端肽Elisa
釀酒酵母 酵母浸出物葡萄糖土霉瓊脂培養(yǎng)基Ⅱ型肺泡表面抗原Elisa
球孢白僵 Amies運(yùn)送培養(yǎng)基(含活性炭)Ⅱ型膠原Elisa
平菇2180 硅酸鹽細(xì)培養(yǎng)基Ⅱ型膠原C端肽Elisa
香菇 E-2-辛烯Ⅲ型膠原Elisa
志賀氏 6.5%肉湯Ⅲ型前膠原氨基N端肽Elisa
孢囊放線 Stuart運(yùn)送培養(yǎng)基Ⅳ型膠原Elisa
寡營(yíng)養(yǎng)單胞屬 MSA培養(yǎng)基Bcl-2相關(guān)X蛋白Elisa
交織頂孢霉 產(chǎn)氣莢膜梭測(cè)定用培養(yǎng)基B瘤因子2Elisa
匍枝根霉(黑根霉) 5,10,15,20-四(五氟苯基)卟啉CD147分子Elisa