商品介紹:
Irinotecan(CPT-11)能通過抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶1阻止DNA的解旋。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):97682-44-5 別名:(+)-Irinotecan;CPT-11 純度:98.78% 分子量:586.68 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
黑曲霉磷化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體Human RHOB ELISA Kit組織蛋白H(CTSH)
*櫻桃鏈格孢白介28受體抗體Human RHEB ELISA Kit組織蛋白G自身抗體(Cath G Ab)
球孢白僵菌KB抑制蛋白激Ζ抗體Human RGS1(Regulator of G-protein signaling 1) ELISA Kit組織蛋白G(cath-G)
亞歷山大富鹽菌胰島基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1抗體Human RFXAP ELISA Kit組織蛋白D(cath-D)
爪哇根霉整合β1結(jié)合蛋白2抗體Human RGMA ELISA Kit組織蛋白C(CTSC)
黑曲霉線粒體翻譯起始因子3抗體Human RGS11 ELISA Kit組蛋白乙?;?HAT)
栗疫菌白介27β抗體Human RFC3 ELISA Kit組蛋白脫乙?;?(HDAC2)
猴頭菌胰島樣生長(zhǎng)因子1受體抗體Human RGR ELISA Kit組蛋白去乙酰化3(HDAC3)
鐮刀菌FBXL11蛋白抗體Human IFI35(Interferon-induced 35 kDa protein) ELISA Kit組蛋白去乙?;?HDAC)
草青霉免疫球蛋白超家族成員21抗體Human RFC4 ELISA Kit組蛋白賴N-甲基轉(zhuǎn)移SETD7(SETD7)
冠突曲霉白介9抗體Human RECQL4 ELISA Kit組蛋白H3.3(H3F3A/H3.3A/H3F3/PP781H3F3B/H3.3B)
埃切假絲酵母乙酰乳合成蛋白抗體Human RECQL5 ELISA Kit組蛋白H2b(histon-H2b)
釀酒酵母異檸檬脫氫1抗體Human RFC5 ELISA Kit組(HIS)
乳菇屬IKK激相互作用蛋白抗體Human REDD1(Protein regulated in development and DNA damage response 1) ELISA Kit足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)
泌液克里格范瑞吉酵母磷化核因子NFκB抑制蛋白激i抗體Human RFFL ELISA Kit總前列腺特異抗原(tPSA)
大櫻桃葉細(xì)菌性穿孔病*白介8抗體Human REEP1 ELISA Kit總蛋白S(TPS)
葉下珠生擬莖點(diǎn)霉Phomopsis│phyllanthicola C.Q. Chang Z.D. Jiang & P.K. Chi 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)漆黃
小單孢菌Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)烏藥內(nèi)酯
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)辛夷脂
DNA解旋抑制劑(Irinotecan)微小根毛霉 對(duì)苯乙酮糖化蛋白Elisa
大腸埃希氏桿 4-溴苯乙酮天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
德氏乳桿保加利亞亞種 對(duì)異基苯透明質(zhì)酸Elisa
榛色假單胞 三乙氧基硅烷脫氧吡啶酚;脫氧吡啶啉Elisa
芽孢桿屬 3-(Boc-氨基)吡咯烷晚期糖基化終末產(chǎn)物Elisa
動(dòng)球 4-甲酯基苯酸維生D結(jié)合蛋白Elisa
毛霉屬 1-芐基-3-(Boc-氨基)吡咯烷色P4502E1Elisa
變異鏈球 草酰二肼心肌特異性肌鈣蛋白TElisa
多形布勒擔(dān)子酵母 4-硝基鄰苯二鋅金屬硫蛋白Elisa
香菇 三乙基硅烷血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Elisa
溶淀粉類芽孢桿 2--3′,4′-二羥基苯乙酮血管生長(zhǎng)Elisa
紫黑杜搟氏 (S)-4-苯基-2-惡唑烷酮血管性血友病因子Elisa
緋紅密孔 疊氮化四丁基銨血清淀粉樣蛋白AElisa
爪哇根霉 5-氨基間苯二甲酸血小板活化因子Elisa
謝瓦氏曲霉 1,3,5-金剛烷三血小板源性生長(zhǎng)因子Elisa