商品介紹:
TAPI-2是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP),腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶(TACE)和解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶(ADAM)的廣譜抑制劑,對MMP的IC50值為20±10μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:187034-31-7 純度:95.93% 分子量:415.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
巴氏醋桿菌擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)Anti-FUT3 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153
大腸埃希菌黏膜選址(抗原)Anti-FUNDC1 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153
異常威克漢姆酵母髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原)Anti-G3BP2 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125
金針菇髓鞘相關(guān)糖蛋白(抗原)Anti-FZD9 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125
大豆慢生根瘤菌基質(zhì)金屬蛋白-1(小鼠抗原)Anti-G3BP1 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)
Bacillus aryabhattai 中腦核仁蛋白1(抗原)Anti-GAB2 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)
細(xì)麗擬盤多毛孢中腦核仁蛋白2(抗原)Anti-GABARAPL2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)
蘋果鏈格孢菌一種應(yīng)激分子抗原Anti-GABBR2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)
谷棒桿菌多藥耐藥相關(guān)蛋白3(抗原)Anti-GABRA6 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)
蠟葉散囊菌多藥耐藥相關(guān)蛋白1(抗原)Anti-GABRA4 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)
木糖氧化無色桿菌肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原)Anti-GABRA3 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)
紅色鏈孢囊菌間皮(多肽抗原)Anti-GABRB1 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)
小柄凸臍蠕孢MSH2抗原Anti-GABRE Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)
節(jié)桿菌神經(jīng)激肽B受體(抗原)Anti-GABRD Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)
總狀毛霉低分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)Anti-GABRG1 Antibody人抑瘤M(OSM)
敏捷食菌中分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)Anti-GAK Antibody人抑瘤M(OSM)
溶質(zhì)載體蛋白家族20成員2抗體地衣形芽孢桿菌人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
線粒體二羧載體蛋白抗體Herbaspirillumcanariense羅猴胎腎細(xì)胞
溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體Herbaspirillumaurantiacum高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞
突觸結(jié)合蛋白1抗體Herbaspirillumsoli白介-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞
MMP/TACE和ADAM抑制劑(TAPI-2)禾赤鐮孢 苦杏仁苷
中國漢納酵母 氫
葡萄座腔 1-氨基-2-萘-4-磺酸
云芝 黃芩苷
水研處硝酸鹽還原 葛根
柳樹漆斑病 柚皮苷
栗疫 固酮
孟氏假單胞 6-正基-2-硫代
沙地青霉 甲基環(huán)戊烯酮
釀酒酵母 芘
棘腐霉 尿酸
黃曲霉 鞣花酸
嗜松青霉 阿魏酸乙酯
肺形側(cè)耳,平菇 松香酸
白絲倫茨氏 安息香膠