以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
ITE是一種芳香烴受體(AhR)激動(dòng)劑,Ki值為3nM,ITE作用于OVCAR-3細(xì)胞增殖為,IC50值為0.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):448906-42-1 純度:98.0% 分子量:286.31 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
腸桿菌屬人類(lèi)皰疹病8抗原Anti-FLT3 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
侵染鏈格孢缺氧誘導(dǎo)因子1α 多肽Anti-FLT4 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
弗雷曲霉組蛋白H3樣蛋白多肽Anti-FMN2 Antibody人P53(P53)
果生鏈核盤(pán)菌組蛋白H3樣蛋白(C端多肽)Anti-FLT3 Antibody人P53(P53)
葡萄座腔菌組蛋白H3樣蛋白(N端多肽)Anti-FNTB Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
釀酒酵母艾滋病病-1/人類(lèi)免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FOLH1 Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
哈茨木霉艾滋病病-1/人類(lèi)免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FN1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
產(chǎn)克雷伯氏菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOLR1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
玉米黑粉菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOS Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
突孢毛殼荷爾蒙敏感脂肪(抗原)Anti-FOXB2 Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
多粘類(lèi)芽胞桿菌熱休克蛋白-27(抗原)Anti-FOXD3 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
釀酒酵母熱休克蛋白90α(抗原)Anti-FOXD4L1 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
枯草芽孢桿菌熱休克蛋白-90β (抗原)Anti-FOXC1 Antibody人鐵蛋白(FE)
阪崎腸桿菌腫瘤凋亡ASPP家族的另一個(gè)成員(抗原)Anti-FOXD4 Antibody人鐵蛋白(FE)
*芽胞桿菌(Bacillus atrophaeus)ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)間粘附分子-1Anti-FOXD4L6 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
核盤(pán)菌白介1β(白介-1β)(多肽抗原)Anti-FOXE1 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
可溶性附著蛋白α-SNAP抗體豬霍亂沙門(mén)氏菌豬霍亂亞種綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞
肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活抑制蛋白2抗體停乳鏈球菌小鼠肝癌細(xì)胞
分泌和跨膜蛋白1抗體綠膿假單胞菌(綠膿桿菌)人成骨肉瘤細(xì)胞
生成相關(guān)蛋白3抗體雅致放射毛霉=葡匐放射毛霉人卵巢顆粒細(xì)胞瘤
芳香烴受體(AhR)激動(dòng)劑(ITE)茂原鏈霉 草酸亞鐵二水合物
球孢白僵 海
枯草芽孢桿 乙酸鈉
枯草芽孢桿 六氨和化鈷
嗜酸熱雙歧桿嗜酸熱亞種 5-羥甲基糠
北京紅簍 芴
金黃鱗蓋傘 菲啰一鈉鹽
F21(引)(金針菇) 三二鈉鹽
宇佐曲霉 沒(méi)食子酸月桂酯
金針菇 二硫代草酰氨
深黃小毛霉 1,3-二苯脲
毛柄(金針菇) 丁二酮肟二鈉鹽八水合物
枯草芽孢桿 N,N-二甲基甘鹽酸鹽
抗生鏈霉 L-(+)-二苯甲酰一水物
澳型核果褐腐病 D-(-)-二苯甲酰一水物