以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
碘化丙啶染液(1mg/ml) | Propidium Iodide Staining Solution(1mg/ml) | 1ml | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
本品是溶于水的PI儲存液,濃度為1mg/ml,只需用合適的緩沖液稀釋到工作液即可。 碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種常用的細(xì)胞核熒光染料,作為一種溴化乙錠(EB)的類似物,能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性,大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合,需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合,熒光信號明顯增強20-30倍,大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40nm,大發(fā)射波長向藍(lán)色波段遷移~15nm,從而使其大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?35/617nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低,但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體,只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡,共聚焦顯微鏡,流式細(xì)胞儀以及熒光計分析。 PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外,但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。利用這一特性,通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用,同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定,用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑,兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù),包括直接或者間接的熒光抗體檢測,mRNA原位雜交,細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。 CAS:25535-16-4 分子式:C27H34I2N4 分子量:668.4 純度:≥95% by HPLC 溶解性:溶于水(1mg/ml) 儲存條件:4℃,避光,有效期6個月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
跨膜絲蛋白2(TMPRSS2)英文名稱:TMPRSS2 ELISA Kit活化半胱蛋白蛋白3抗體包裝25g
跨膜蛋白27(TMEM27)英文名稱:TMEM27 ELISA Kit7號染色體開放閱讀框61抗體包裝5g
克拉拉細(xì)胞蛋白16(CC16)英文名稱:CC16 ELISA Kit少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗體包裝1g
可溶性半乳糖凝集3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)英文名稱:LGALS3BP ELISA Kit激分子B7-1蛋白抗體包裝1g
顆粒體蛋白(GRN)英文名稱:GRN ELISA Kit末端補體復(fù)合物抗體包裝250mg
顆粒M(GZMM)英文名稱:GZMM ELISA Kit8號染色體開放閱讀框55抗體包裝25g
顆粒K(GZMK)英文名稱:GZMK ELISA Kit補體C4a+C4b蛋白抗體包裝5g
顆粒B(GZMB)英文名稱:GZMB ELISA KitCD44V7抗體包裝100g
顆粒A(GZMA)英文名稱:GZMA ELISA KitCD44V10抗體包裝25g
抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)英文名稱:PCNA ELISA KitCD44V4抗體包裝1g
抗凝血(AT)英文名稱:AT ELISA Kit緊密連接蛋白4抗體包裝25g
抗繆勒管激(AMH)英文名稱:AMH ELISA Kit6號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g
抗利尿激(ADH)英文名稱:ADH ELISA KitL型鈣通道蛋白抗體包裝100g
抗酒石性磷(ACP5)英文名稱:ACP5 ELISA Kit電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體包裝25g
抗肌蛋白(UTRN)英文名稱:UTRN ELISA Kit緊密連接蛋白3抗體包裝5g
: AS1.3221資源名稱: 約氏乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:含量> 99%,BR,可用于培養(yǎng)酯酰甘油激ζ試劑盒梓;Catalpol
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)脂氧A4試劑盒知母皂苷 BⅡ;Timosaponin
藍(lán)色犁頭霉Absidia│coerulea 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品脂聯(lián)受體2試劑盒梔子苷;Geniposide
碘化丙啶染液(1mg/ml)布拉克須霉 三苯吡啶粘膠蛋白;肌腱蛋白CElisa
干酪乳桿 3,5-二溴芐真胰島Elisa
茄鏈格孢 呋喃銨鹽整合α2β1Elisa
假單胞 鄰硝基對甲砜基氯苯整合αVβ3Elisa
蕈狀芽孢桿 5-磺基水楊酸整合結(jié)合唾液蛋白Elisa
亞鉤針孔 四氫吡喃-4-羧酸乙酯正常T表達(dá)和分泌因子Elisa
卡伍爾鏈霉 番酸脂阿拉伯甘露聚糖Elisa
帕氏食氫產(chǎn)水 奧利司他脂蛋白αElisa
雀斑蘑菇 4-叔丁氧羰肼基脂蛋白磷脂A2Elisa
黑曲霉 吡羅昔康-β-環(huán)糊精脂蛋白脂Elisa
浸麻類芽孢桿 2,6-二氯-5-氟煙酰乙酸乙酯脂多糖;內(nèi)Elisa
伯頓畢赤酵母 (R)-(+)-2-(4-羥基苯氧基)酸甲酯脂多糖結(jié)合蛋白Elisa
解烷烴游動微 3-溴-5-氯苯脂肪甘油三酯脂Elisa
盤長孢狀盤孢 2-溴-3-氯苯脂肪Elisa
Microvirga aerophila 2-甲氧基-4-氟吡啶脂肪酸合成Elisa