商品介紹:
AS-605240是一種有效的特異性PI3Kγ抑制劑,IC50值為8nM,Ki值為7.8nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:648450-29-7 純度:98.0% 分子量:257.27 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
馬特鏈霉菌髓系觸發(fā)受體1抗體Anti-IL1B Antibody碳酐Ⅱ(CA2)
樟疫霉抑制劑抗體Anti-IL1R1 Antibody碳酐Ⅰ(CA1)
橙色農(nóng)霉菌味覺感受器蛋白T2R6抗體Anti-IL2 Antibody碳分解代謝物阻遏4樣蛋白(CCRN4L)
多主葡萄座腔菌味覺感受器蛋白T2R38抗體Anti-IL2 Antibody炭疽熱受體2(ANTXR2)
鼠李糖乳桿菌5色羥化2抗體Anti-IL2 Antibody肽酰甘α?;瘑窝?PAM)
毛柄金錢菌(金針菇)硫氧還蛋白11抗體Anti-IL2 Antibody肽抑制因子16(PI16)
其他質(zhì)粒菌種微管蛋白4α抗體Anti-IL22 Antibody肽抑制因子15(PI15)
污黑腐皮殼動力蛋白輕鏈Anti-IL22 Antibody肽D(PEPD)
佛羅里達(dá)側(cè)耳腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體Anti-IL2 Antibody肽聚糖識別蛋白2(PGLYRP2)
茄腐鐮刀菌血小板生成受體抗體Anti-IL22 Antibody肽聚糖識別蛋白1(PGLYRP1)
棘腐霉跨膜絲蛋白5抗體Anti-IL2 Antibody肽基脯酰異構(gòu)F(PPIF)
枯草芽孢桿菌脫中胚蛋白抗體Anti-IL23A Antibody肽基脯酰異構(gòu)E(PPIE)
杰丁畢赤酵母生長抑制基因1蛋白抗體Anti-IL23A Antibody肽基脯酰順反式異構(gòu)NIMA相互作用蛋白4(PIN4)
嗜角蛋落霉甲狀腺T4抗體Anti-IL23R Antibody肽基精脫亞Ⅵ(PADI6)
粉紅聚端孢霉轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體Anti-IL25 Antibody肽基精脫亞Ⅳ(PADI4)
粉紅單端孢甲基雙加氧TET2抗體Anti-IL27 Antibody胎球蛋白B(FETUB)
SCEL蛋白抗體白色食藻菌小鼠尿道上皮細(xì)
相關(guān)抗原8抗體遲緩愛德華氏菌(暫無)小鼠輸尿管上皮細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞識別的鱗狀細(xì)胞抗原抗體皮氏羅爾斯通氏菌小鼠腎管狀上皮細(xì)胞
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接蛋白1抗體馬氏鏈球菌小鼠子宮頸上皮細(xì)胞
PI3Kγ抑制劑(AS-605240)嗜松青霉 鉍、鎵、鋰、鉬、磷、銣/Bi, Ga, Li, Mo, P, Rb溶Elisa
枯草芽孢桿 鉍、銅、鐵、鉛、鈀、銻/Bi, Cu, Fe, Pb, Pd, Sb乙酰受體Elisa
雷夫松氏屬 鉍、鎘、鐵、銦、鉛、鋅/Bi, Cd, Fe, In, Pb, Zn腎上腺受體Elisa
鼠李糖乳桿 鉍、鎘、鈷、銅、鐵、銦/Bi, Cd, Co, Cu, Fe, In谷氨酸脫羧Elisa
寬脊曲霉 、鈣、、鎂、鉬、鈉/B, Ca, K, Mg, Mo, Na5-羥色氨酸Elisa
糙孢籃狀 砷、鈷、銅、鐵、鎳、鉛/As, Co, Cu, Fe, Ni, Pb17α,20β-雙羥孕酮Elisa
小麥全蝕病 砷、鎘、銅、鎳、鉛、鋅/As, Cd, Cu, Ni, Pb, Zn5羥色Elisa
木蹄層孔 砷、鎘、銅、鐵、錳、鉛/As, Cd, Cu, Fe, Mn, Pb多巴Elisa
檸檬酸桿 砷、鎘、鉻、銅、鉛、鋅/As, Cd, Cr, Cu, Pb, Zn去甲腎上腺Elisa
綠色木霉 砷、鎘、鉻、銅、汞、鉛/As, Cd, Cr, Cu, Hg, Pb乙酰Elisa
貝氏葡萄座腔梨專化型 砷、鉍、鎳、鉛、銻、鋅/As, Bi, Ni, Pb, Sb, Zn血紅蛋白Elisa
綠色木霉 砷、鉍、銅、鉛、銻、硒/As, Bi, Cu, Pb, Sb, Se腎損傷分子1Elisa
大杯傘 銀、鉍、銅、鐵、鉛、銻/Ag, Bi, Cu, Fe, Pb, Sb磷脂A2Elisa
纖維單胞屬 銀、鋁、砷、鉛、、釩/Ag, Al, As, Pb, Tl, V環(huán)氧合Elisa
島青霉 氟,,溴,硝酸根,硫酸根,磷酸根/F ,Cl, Br, NO3, SO4, PO4花生四烯酸5-脂氧合Elisa