商品介紹:
PF-04957325是一種高效的選擇性的PDE8抑制劑,對PDE8A和PDE8B的IC50值分別為0.7nM和小于0.3nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1305115-80-3 純度:98.48% 分子量:400.38 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
香栓孔菌RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白C抗體Anti-Desmin Antibody載脂蛋白L4(APOL4)
加州鏈霉菌R-鈣粘附分子抗體Anti-DGAT1 Antibody載脂蛋白L3(APOL3)
木賊鐮孢ras癌基因家族RAB8B抗體Anti-DGCR8 Antibody載脂蛋白L2(APOL2)
嗜堿海螺菌Ras樣蛋白B抗體Anti-DGKZ/DGK-zeta Antibody載脂蛋白H(APOH)
膠紅酵母視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白p130抗體Anti-DHODH Antibody(PB1112)載脂蛋白F(APOF)
枯草芽胞桿菌維甲誘導(dǎo)蛋白17抗體Anti-DHX9 Antibody載脂蛋白E(APOE)
蘋果鏈格孢菌RAN GTPase激活蛋白1抗體Anti-DHFR Antibody(PB0133)載脂蛋白D(APOD)
大腸埃希菌減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體Anti-DHX15 Antibody載脂蛋白C4(APOC4)
盤長孢狀盤孢視黃脫氫2型抗體Anti-DICER1 Antibody載脂蛋白C3(APOC3)
金黃色葡萄球菌金黃亞種再生基因蛋白4抗體Anti-DIO1 Antibody載脂蛋白C2(APOC2)
卡利比克邁耶氏酵母受體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體Anti-DIABLO Antibody載脂蛋白C1(APOC1)
季也蒙畢赤酵母G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白21抗體Anti-DIS3 Antibody載脂蛋白B48(APOB48)
茶炭疽病再生基因蛋白4抗體Anti-DISC1 Antibody載脂蛋白B100(APOB100)
枯草芽孢桿菌受體相互作用蛋白激1抗體Anti-DISC1 Antibody載脂蛋白B(APOB)
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)RB1的誘導(dǎo)卷曲蛋白RB1CC1抗體Anti-DKK1 Antibody載脂蛋白A5(APOA5)
綠僵菌環(huán)指蛋白211抗體Anti-DLD Antibody載脂蛋白A4(APOA4)
人蒼白桿菌Ochrobactrum│anthropi 質(zhì)量規(guī)格:含量97%-103%,標(biāo)準(zhǔn)品
紅褐曲霉Aspergillus│rutilans 質(zhì)量規(guī)格:>97%
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
PDE8抑制劑(PF-04957325)產(chǎn)紅青霉 CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化生長因子βElisa
基簡馬杜拉放線 SCHAEDLER瓊脂轉(zhuǎn)化生長因子β1Elisa
尿腸球 Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ)轉(zhuǎn)鐵蛋白Elisa
褐紅小孔 2,5-二吡啶轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Elisa
蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 Campy-Cefex添加劑總蛋白Elisa
平菇 Nα-甲酰基-DL-色氨酸總抗氧化能力Elisa
托姆青霉 L-1,4-二硫代蘇糖阻抑Elisa
豌豆根瘤 4-甲基組Elisa
黑曲霉 (S)-(-)-環(huán)氧烷組織因子Elisa
玉米乳桿 三(二基)膦腦磷脂Elisa
假單胞 二環(huán)己烷并18-冠-6卵磷脂Elisa
黃肉座 2,2'-(2-丁炔-1,4-二基二氧)二乙(含約的異構(gòu)體)心磷脂Elisa
樟疫霉 苯基三乙基溴化銨鞘磷脂Elisa
解脂假絲酵母 單硝酸異山梨酯偽狂犬病病GPIElisa
香菇 2-氨基-5-內(nèi)皮型一氧化氮合Elisa