公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:RET激酶抑制劑(AST 487)
英文名稱:AST 487
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
AST487是一種RET激酶抑制劑,IC50為880nM,抑制RET自磷酸化,及下游效應(yīng)器激活,也抑制Flt-3,IC50為520nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):630124-46-8 別名:NVP-AST 487 純度:98.64% 分子量:529.56 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
短小芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記人IgAAnti-KDELR3 Antibody人水痘帶狀皰疹病IgM(VZV-IgM)
枯草芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記猴IgGAnti-KDR Antibody人水痘帶狀皰疹病IgM(VZV-IgM)
熱淀粉鏈霉菌羅丹明標(biāo)記猴IgMAnti-KDM4B Antibody人水痘帶狀皰疹病IgG(VZV-IgG)
慢生根瘤菌羅丹明標(biāo)記小鼠IgMAnti-KEL Antibody人水痘帶狀皰疹病IgG(VZV-IgG)
pMD2.G羅丹明標(biāo)記豬IgGAnti-KDR Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)
日本山茶盤孢羅丹明標(biāo)記水貂IgGAnti-KDR Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)
微小桿菌羅丹明標(biāo)記兔IgMAnti-KIF13B Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM )
節(jié)桿菌羅丹明標(biāo)記大鼠IgMAnti-KIAA0100 Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM )
水稻漢納酵母羅丹明標(biāo)記重組人白介-1受體拮抗劑Anti-KIF20B Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)
米根霉羅丹明標(biāo)記豬胰島蛋白Anti-Kinesin-1 Antibody人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)
玫紅假裸囊菌羅丹明標(biāo)記血藍(lán)蛋白Anti-KIR2DL1 Antibody人腮腺炎病IgM
醋桿菌屬羅丹明標(biāo)記雞卵白蛋白Anti-KIR2DL5A Antibody人腮腺炎病IgM
病研所芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記胰糜蛋白Anti-KIR2DL5B Antibody人腮腺炎病IgG
Marisediminicola熒光標(biāo)記人胰島蛋白Anti-KIR3DL1 Antibody人腮腺炎病IgG
死亡谷芽孢桿菌金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)Anti-KIR2DL5B Antibody人EB病IgM(EBv IgM)
產(chǎn)朊假絲酵母金標(biāo)記兔抗人IgA(10nm/15nm)Anti-KIR3DL2 Antibody人EB病IgM(EBv IgM)
ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體毛木耳(紫木耳、黃背木耳)tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類)
G蛋白P21RAC2抗體發(fā)光假蜜環(huán)菌人乳腺癌細(xì)胞(穩(wěn)轉(zhuǎn)pTet-on質(zhì)粒)
ras癌基因家族RAB20抗體膠紅酵母人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移系
Ras樣蛋白A+B抗體小紅酵母人腦多型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
RET激酶抑制劑(AST 487)葡萄座腔 二乙酸長(zhǎng)葉九里香內(nèi)酯二酯
環(huán)狀芽孢桿 楊梅
蠟樣芽孢桿 九里香亭,九里香,長(zhǎng)葉九里香內(nèi)酯二
解脂假絲酵母 九里香
畢赤酵母 桑根皮
雜色云芝 Moracin O
黑曲霉 Momor-腦苷脂I
產(chǎn)朊假絲酵母 小蕓木香豆精
釀酒酵母 米內(nèi)苷
芽孢桿 甲基赤芝萜酮
地衣芽孢桿 迷迭香酸甲酯
黑單Au(單片木耳) Methyl lycernuate A
黑曲霉 Methyl eichlerianate
海水科維爾氏 二萜酸甲酯
蘇云金芽胞桿九州亞種 Mearnsitrin