商品介紹:
Sotrastaurin是一種有效的泛PKC抑制劑,作用于PKCθ,PKCβ,PKCα,PKCη,PKCδ和PKCε,Ki分別為0.22nM,0.64nM,0.95nM,1.8nM,2.1nM和3.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):425637-18-9 別名:AEB071 純度:99.70% 分子量:438.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
尖孢鐮孢α1微球蛋白抗體Human total SOD(superoxide dismutase) ELISA Kit豬β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體Human peptidoglycan(peptidoglycan) ELISA Kit豬β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒
豬丹絲菌腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體Human CRTC2(CREB-regulated transcription coactivator 2) ELISA Kit豬β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒
木霉AMPK的相關(guān)蛋白激5抗體Human TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit豬α干擾(IFN-α)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體Human MBD3(Methyl-CpG-binding domain protein 3) ELISA Kit豬αN乙酰葡糖糖苷(NAGLU)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬腺苷脫抗體Human IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit豬α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒
腸膜明串珠菌含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體Human TLR8(Toll-like receptor 8) ELISA Kit豬Tau蛋白免疫試劑盒
豇豆慢生根瘤菌ATRNL1蛋白抗體Human MBD2 ELISA Kit豬Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒
爪哇擬青霉AFP4a蛋白抗體Human LCMT1(Leucine carboxyl methyltransferase 1) ELISA Kit豬S100B蛋白(S-100B)免疫試劑盒
多量毛霉鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體Human DNASE2(Deoxyribonuclease-2-alpha) ELISA Kit豬p物質(zhì)(SP)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體Human Anti-LAMP2(Anti-lysosomal Associated Membrane Protein 2 Antibody) ELISA Kit豬P450膽固側(cè)鏈裂解(P450scc)免疫試劑盒
長(zhǎng)雙歧桿菌β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體Human anti-nCoV(N) IgG ELISA Kit豬N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)免疫試劑盒
油橄欖生曲霉早老穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌組件蛋白APH1抗體Human antioV(N) IgM ELISA Kit豬Na+/K+-ATP(Na/K ATPase)免疫試劑盒
分枝農(nóng)霉菌磷化蛋白激AKT1抗體Human FOLR3(Folate receptor gamma) ELISA Kit豬L-乳脫氫(L-LDH)免疫試劑盒
楚氏喜鹽芽孢桿菌磷化蛋白激AKT1抗體Human CTHRC1(Collagen triple helix repeat-containing protein 1) ELISA Kit豬E選擇(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒
芽孢桿菌ASH1L蛋白抗體Human CH25H(Cholesterol 25-hydroxylase) ELISA Kit豬D-乳脫氫(D-LDH)免疫試劑盒
: NICPBP44180資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%,Biotech Grade激M2型同工試劑盒氧化槐定堿
微桿菌Microbacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:活:>50U/mg,進(jìn)分試劑盒薏苡
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)二單酰試劑盒8-氧黃連堿
泛PKC抑制劑(Sotrastaurin)乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Humic acid單絲蛋白激1抗體包裝25g
類葉升麻苷,毛蕊花糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Usaramine低分子量蛋白體7抗體包裝5g
藜蘆英文名稱: L-Aspartic acid sodium salt促黃體生成抗體包裝1g
里卡靈A英文名稱: Taxifolin層粘蛋白α1抗體包裝250mg
利卡靈-B;利卡靈B英文名稱: TaxifolinLETM1蛋白抗體包裝1g
利血平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aloeemodin乳脫氫抗體包裝250mg
櫟櫻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aloeemodin磷化絲/蘇蛋白激抗體包裝5g
連錢草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochrome C層粘連蛋白β1抗體包裝100g
連翹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochrome C鼻咽癌癌基因抗體包裝25g
連翹苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cytochrome C白血病抑制因子受體抗體包裝500g
連翹酯苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Berberine hydrochloride核纖層蛋白A抗體包裝5g
連翹酯苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Berberine hydrochloride核纖層蛋白B抗體(核膜標(biāo)志物)包裝1g
連翹酯苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Geniposidic acid核纖層蛋白A/C抗體包裝25g
蓮心堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Geniposidic acidLRIG2抗體包裝5g
蓮心堿高鹽英文名稱: 3,4-Dihydroxybenzoic acid增強(qiáng)因子-1抗體包裝1g