以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Tivozanib(AV-951;KRN951)是有效,選擇性的VEGFR1/2/3抑制劑,IC50值分別為0.21,0.16,and0.24nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:475108-18-0 別名:AV-951;KRN951 純度:99.46% 分子量:454.86 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母造血干抗原(多肽抗原)Anti-FADD Antibody人成熟促進(jìn)因子(MPF)
芹側(cè)耳(杏鮑菇)CD147(抗原)Anti-FAIM2 Antibody人成熟促進(jìn)因子(MPF)
枯草芽孢桿菌CD169抗原Anti-FADD Antibody人去唾液糖蛋白受體(AGSPR)
大腸埃希氏菌B 和 T 淋巴衰減蛋白(抗原)Anti-FAM117B Antibody人去唾液糖蛋白受體(AGSPR)
薄花邊傘周期依賴激2(抗原)Anti-FANCA Antibody人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)
果生鏈核盤菌周期依賴性激4(抗原)Anti-FANCD2 Antibody人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)
大腸埃希氏菌人癌胚抗原Anti-FANCC Antibody人金屬硫蛋白(MT)
釀酒酵母蕈堿型乙酰受體M2(抗原)Anti-FAP Antibody人金屬硫蛋白(MT)
奧氏蜜環(huán)菌間隙連接蛋白43(多肽片斷抗原)Anti-FANCG Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)
惡臭假單胞菌間隙連接蛋白45(抗原)Anti-FASN Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)
鏈格孢II 型膠原(抗原)Anti-FARP2 Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)
大腸埃希菌表面趨化因子受體1抗原Anti-FASTK Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)
秀珍菇前列腺氧化環(huán)化2(抗原)Anti-FASTKD1 Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)
大腸桿菌C-藻藍(lán)(藻藍(lán)蛋白)Anti-FASTKD1 Antibody人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)
灰色鏈霉菌灰色亞種結(jié)締組織生長因子(多肽抗原)Anti-FASTKD2 Antibody人黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)
枯草芽孢桿菌周期E/原癌基因抗原Anti-FASTKD3 Antibody人黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)
堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子SCXA抗體成團腸桿菌(成團泛菌)人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
轉(zhuǎn)錄因子同源框蛋白SIX2抗體阪崎腸桿菌人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
硫酯修飾因子1抗體棉花立枯菌人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
絲/蘇激33抗體納地青霉人肺支氣管癌細(xì)胞
VEGFR1/2/3抑制劑(Tivozanib)枯草芽孢桿 磷酸氫二鈉七水物
臭黃菇 磷酸二氫鈉一水物
靈芝 2-硝基乙酰苯
地衣芽孢桿 六氟異
Deinococcus xibeiensis Wang et al. 硫代乳酸
TA102 鼠傷寒沙門氏 1,3-二羥基萘
薄花邊傘 2 4 6-三磺酸
類芽孢桿屬 代硫代乙酰
果生鏈核盤 β-巰基乙
枯草芽孢桿(質(zhì)控) 3,5-二水楊酸
葡萄座腔 水楊酸肟酸
Aureimonas 齊墩果酸
慢生土地桿 甘草酸單鹽
阿達(dá)青霉 N-異基烯酰
雞汁菇 4-乙基