商品介紹:
Roflumilast N-oxide是一個PDE4型抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:292135-78-5 分子量:419.21 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
鴨疫里氏桿菌成纖維生長因子受體4抗體Human CDIPT (CDP-diacylglycerol–inositol 3-phosphatidyltransferase) ELISA KIT牛單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
嘴突凸臍蠕孢凝血原(纖維介)抗體Human CASKIN1 (Caskin-1) ELISA KIT牛催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒
牛布氏菌陽性血清品(虎紅平板)衰老關(guān)鍵蛋白抗體Human CMYA5 (Cardiomyopathy-associated protein 5) ELISA KIT牛催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
Rhizobium 凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體Human CRTAC1 (Cartilage acidic protein 1) ELISA KIT牛促性腺激釋放激(GnRH)免疫試劑盒
塔氏糖多孢菌凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體(短型)Human NCAM2(Neural cell adhesion molecule 2) ELISA Kit牛促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
銅綠假單胞菌纖維連接蛋白抗體Human CABS1 (Calcium-binding and spermatid-specific protein 1) ELISA KIT牛促卵泡(FSH)免疫試劑盒
大腸埃希菌FosB蛋白抗體Human MICU1(Calcium uptake protein 1, mitochondrial) ELISA Kit牛促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒
金黃殼囊孢FRA2/FOSL2抗體Human CAPS2 (Calcyphosin-2) ELISA KIT牛雌(E1)免疫試劑盒
墳墓節(jié)桿菌叉頭蛋白P3抗體Human CCIN (Calicin) ELISA KIT牛雌三(E3)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌成纖維生長因子8抗體Human CAMSAP1 (Calmodulin-regulated spectrin-associated protein 1) ELISA KIT牛雌激(E)免疫試劑盒
土曲霉肌動蛋白結(jié)合蛋白Fascin抗體Human AP1M1(AP-1 complex subunit mu-1) ELISA Kit牛雌二(E2)免疫試劑盒
燒土正青霉線粒體裂變1蛋白抗體Human COMTD1 (Catechol O-methyltransferase domain-containing protein 1) ELISA KIT牛成纖維生長因子23(FGF23)免疫試劑盒
雞縱菌叉頭蛋白P1抗體Human CASQ1 (Calsequestrin-1) ELISA KIT牛成纖維生長因子21(FGF21)免疫試劑盒
蘋果錐梗孢鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克抗體Human CTNND1 (Catenin delta-1) ELISA KIT牛長鏈脂酰CoA脫氫(ACADL)免疫試劑盒
噬尼古丁節(jié)桿菌纖維母生長因子5抗體Human CTCF (Transcriptional repressor CTCF) ELISA KIT牛草酰乙免疫試劑盒
微紫青霉脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體Human CTNNBIP1 (Beta-catenin-interacting protein 1) ELISA KIT牛布魯氏桿菌抗體(IgM)免疫試劑盒
壁芽孢桿菌Bacillus│muralis 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)L-天冬酰
巴貝斯蟲未定種(伊寧株)Babesia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)L-天冬
地芽孢桿菌Geobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC ,>99%(GC)L-蘇
PDE4型抑制劑(Roflumilast N-oxide)石膽(標準品)英文名稱: RivaroxabanDEK癌基因結(jié)合蛋白包裝100g
舒巴坦鈉(標準品)英文名稱: ApixabanPSD95結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
舒巴坦(標準品)英文名稱: PerifosinePSD95結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
(標準品)英文名稱: Anagrelide hydrochloride PSD95結(jié)合蛋白4抗體包裝25g
舒林(標準品)英文名稱: Saquinavir mesylate雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體包裝5g
舒林(標準品)英文名稱: Vardenafil hydrochloride trihydrate雙特異性磷22抗體包裝100g
舒尼替尼堿(標準品)英文名稱: Vardenafil hydrochloride trihydrateErdj5/DNAJC10蛋白抗體包裝25g
雙環(huán)(標準品)英文名稱: Bestatin,Ubenimex腫瘤調(diào)亡/腫瘤壞死因子受體死亡受體6抗體包裝25ml
雙酚磺銨 (聚酚磺雜質(zhì))(標準品)英文名稱: Bestatin,Ubenimex跨膜TMIGD1蛋白抗體包裝5ml
雙脒(標準品)英文名稱: (3,4-Dimethoxyphenyl)acetic acid軸絲中鏈動力蛋白抗體包裝100ml
雙硫化合物(標準品)英文名稱: PD-0325901軸絲動力蛋白7抗體包裝25ml
雙硫侖(標準品)英文名稱: Sitaxsentan sodium; TBC-11249; Thelin環(huán)指蛋白19抗體包裝500ml
雙芬(標準品)英文名稱: Sitaxsentan sodium; TBC-11250; Thelinδ-連環(huán)蛋白抗體包裝25g
雙芬(標準品)英文名稱: Sitaxsentan sodium; TBC-11251; Thelin防御β2抗體包裝1g
雙芬鈉(標準品)英文名稱: Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid磷化信號轉(zhuǎn)導功能磷蛋白DAB2抗體包裝1g