商品介紹:
LY2603618是一種有效的選擇性的Chk1抑制劑,IC50為7nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):911222-45-2 別名:IC-83 純度:99.61% 分子量:436.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Chk1抑制劑(LY2603618) | LY2603618 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
嗜熱鏈球菌白介1受體9抗體Human RPL32 ELISA Kit羊胰島樣生長(zhǎng)因子II(IGF2)免疫試劑盒
勒氏寡食單胞菌RasGTP激活蛋白IQGAP3抗體Human RPL35 ELISA Kit羊水通道蛋白5(AQP5)免疫試劑盒
蘋(píng)果交鏈孢Iroquois同源蛋白1抗體Human RPL10A ELISA Kit羊生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)免疫試劑盒
阪崎腸桿菌跨膜蛋白BRI抗體Human RPL11 ELISA Kit羊溶菌(LZM)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌跨膜蛋白ITM2C抗體Human RPL12 ELISA Kit羊抗單鏈DNA抗體/變性DNA(ssDNA)抗體免疫試劑盒
嗜熱脂肪地球芽胞桿菌白介31抗體Human RPL13A ELISA Kit羊環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
微小毛霉人血清型免疫球蛋白A抗體Human RPL15 ELISA Kit羊環(huán)磷鳥(niǎo)苷(cGMP)免疫試劑盒
綠針假單胞菌Irx3蛋白抗體Human RPL14 ELISA Kit羊促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)免疫試劑盒
斯氏假單胞菌頂端體蛋白10抗體Human KYNU(Kynureninase) ELISA Kit羊白介7(IL7)免疫試劑盒
日本根霉人分泌型免疫球蛋白AHuman RPL18A ELISA Kit羊α晶體B鏈(CRYAB)免疫試劑盒
球形賴(lài)芽孢桿菌胰島自身抗原1抗體Human RPL17 ELISA Kit鴨
蠟?zāi)僖葝u基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白2抗體Human RORB ELISA Kit鴨子神經(jīng)肽Y(NP-Y)免疫試劑盒
黑曲霉白介-16抗體Human RPL19 ELISA Kit鴨子磷化腺苷活化蛋白激(pAMPK)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌離子鈣接頭蛋白抗體Human RP2 ELISA Kit鴨子催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒
擬黑馬朗假絲酵母Iroquois同源蛋白4抗體Human CYP7A1(Cholesterol 7-alpha-monooxygenase) ELISA Kit鴨子鼠相關(guān)蛋白(AGRP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌干擾相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白1抗體(神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白PC4)Human RPA2 ELISA Kit鴨生長(zhǎng)激1(GH1)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病毒Coronavirus│Infectious bronchitis virus 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%重樓皂苷VI
泡囊短波單胞菌Brevundimonas│vesicularis 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%鼠尾草酚
海產(chǎn)堿菌Alcaligenes│aquamarinus 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=5%重樓皂苷II
Chk1抑制劑(LY2603618)孟氏假單胞 甘油β乳球蛋白Elisa
HIV假病 Z20-11 4-苯肼鹽酸鹽γ干擾Elisa
紡錘形賴(lài)氨酸芽孢桿 間溴氟苯γ谷氨酰轉(zhuǎn)移Elisa
卷枝毛霉 1,3-環(huán)硫酸酯κ酪蛋白Elisa
巨型艾美耳球蟲(chóng) 2-氨基-5-吡啶白介2受體Elisa
谷氨酸棒桿 2-氨基-5-溴吡啶白介1Elisa
草菇 1-溴-2-氟苯白介10Elisa
金黃色葡萄球 1H-咪唑-4-甲酸白介12Elisa
銅綠假單胞 2-乙酰吡咯白介1βElisa
構(gòu)巢曲霉 四氫噻喃-4-酮白介2Elisa
家園鬼傘 氟羅沙星藥敏紙片白介4Elisa
杏鮑菇 芐基三苯基化磷(BPP)白介6Elisa
蘇云金芽孢桿 2,5-二甲基-2,5-己二白介8Elisa
熱帶頭梗霉 乙基(三苯基膦)乙酸酯半胱氨酸蛋白3Elisa
香蕉 1,3-二硫半胱氨酸蛋白8Elisa