以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Asimadoline是一種有效的κ opioid受體激動(dòng)劑,對(duì)于豚鼠和人類重組κ opioid受體的IC50值分別為5.6和1.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):153205-46-0 別名:EMD-61753 純度:99.36% 分子量:414.54 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母FAHD1蛋白抗體Human CNTLN (Centlein) ELISA KIT牛過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γ(PPARG)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌磷化粘著斑激抗體Human CHPT1 (Cholinephosphotransferase 1) ELISA KIT牛過(guò)氧化氫(CAT)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化粘著斑激抗體Human CHKB (Choline/ethanolamine kinase) ELISA KIT牛果糖(FRA)免疫試劑盒
施氏假單胞菌下頜發(fā)育不良綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體Human DAB1(Disabled homolog 1) ELISA Kit牛胱抑C(CST3/Cys-C)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌FAM134B蛋白抗體Human CENPT (Centromere protein T) ELISA KIT牛胱天蛋白9(Casp-9)免疫試劑盒
地下枝芽孢桿菌磷化范可尼貧血組蛋白A抗體Human CDCA7L (Cell division cycle-associated 7-like protein) ELISA KIT牛胱天蛋白8(Casp-8)免疫試劑盒
青霉屬范可尼綜合征相關(guān)蛋白FANCC抗體Human CGREF1 (Cell growth regulator with EF hand domain protein 1) ELISA KIT牛胱天蛋白7(Casp-7)免疫試劑盒
雙倒卵形紅冬孢酵母菌FXYD離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子6抗體Human CHKA (Choline kinase alpha) ELISA KIT牛胱天蛋白6(Casp-6)免疫試劑盒
葡萄座腔菌Fyn結(jié)合蛋白抗體Human CHKB (Choline/ethanolamine kinase) ELISA KIT牛胱天蛋白3(Casp-3)免疫試劑盒
泡盛曲霉鋅指蛋白FYCO1抗體Human CHPT1 (Cholinephosphotransferase 1) ELISA KIT牛胱天蛋白1(Casp-1)免疫試劑盒
布氏乳桿菌FYTTD1蛋白抗體Human CNTLN (Centlein) ELISA KIT牛骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
MethylobacteriumRNA結(jié)合蛋白9抗體Human CHRM1 (Muscarinic acetylcholine receptor M1) ELISA KIT牛骨成型蛋白受體1B(BMPR-1B)免疫試劑盒
產(chǎn)單核李氏桿菌巖藻糖轉(zhuǎn)移11抗體Human CENPT (Centromere protein T) ELISA KIT牛谷胱甘肽過(guò)氧化(GSH-Px)免疫試劑盒
香菇屬干擾誘導(dǎo)蛋白15抗體Human CENPV (Centromere protein V) ELISA KIT牛谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移A1(GSTA1)免疫試劑盒
白靈側(cè)耳P38相互作用蛋白抗體Human ABCA1(ATP-binding cassette sub-family A member 1) ELISA Kit牛鉤端螺旋體(Leptospira)抗體(IgG)免疫試劑盒
無(wú)花果曲霉鈣粘樣蛋白28抗體Human CHEK1 (Serine/threonine-protein kinase Chk1) ELISA KIT牛睪(T)免疫試劑盒
花臉香蘑Lepista│sordida 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC ,≥99.5%(GC)維生B12
泡盛曲霉Aspergillus│awamori 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)維生B1
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥98.0%(GC)維生A
κ opioid受體激動(dòng)劑(Asimadoline)鞣小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azure I橋粒芯糖蛋白2抗體包裝250g
乳果糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azure II發(fā)育相關(guān)蛋白DAZL抗體包裝50g
乳鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azure A chloride DNA聚合γ抗體包裝250mg
乳依沙吖啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Triclosan死亡受體5抗體包裝250mg
乳糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Resazurin橋粒芯糖蛋白4抗體包裝1g
瑞格列奈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Celestine blue自然殺傷激活受體相關(guān)蛋白DAP12抗體包裝250mg
瑞舒伐他汀鈣/羅蘇伐他汀鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azure B eosinate自然殺傷激活受體相關(guān)蛋白DAP12抗體包裝250mg
塞克硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Limaprost無(wú)精癥缺失基因4抗體包裝1g
塞來(lái)昔布,塞內(nèi)昔布(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azure II eosinate多能發(fā)育相關(guān)基因4抗體包裝5g
噻奈普汀;噻奈普汀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Filipin complex from Streptomyces filipinensis鋅指蛋白DZIP1抗體包裝1g
三(羥基)基甘(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: RosuvastatinNotch信號(hào)通路Delta樣配體1抗體包裝250mg
三雙脒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sudan I/Solvent Yellow 14同源轉(zhuǎn)錄因子DLX1抗體包裝100mg
三基間三酚(1,3,5-三氧基)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sudan II /Solvent Orange 7Hsp90輔助伴侶分子CDC37抗體包裝1g
三化釓六合物英文名稱: Sudan3肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白抗體包裝5g
三生(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sudan IV/Solvent Red 24金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1抗體包裝1g